[发明专利]一种高度兼容磁珠法病毒核酸提取试剂盒的病毒保存液

说明书

本发明公开了一种高度兼容磁珠法病毒核酸提取试剂盒的病毒保存液，其包含以下成分：盐酸胍、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸、异丙醇或乙醇。本发明病毒保存液属于灭活型，具有保存和裂解病毒样本的作用，其能够与市场上常见的各类磁珠法病毒核酸提取试剂盒兼容，提取核酸时，样本与裂解液可以按试剂盒建议的比例至100％之间的任意比例混合，即可以少加甚至不加裂解液，进而提高样本的用量，获得更多的病毒核酸和更准确的检测结果。本发明病毒保存液的成分简单，原料易得，成本较低，可以长时间室温保存样本，无需高温灭活，对操作人员和环境都非常安全，同时降低RNA被降解的可能性，可以获得较多的核酸，降低漏检率。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种高度兼容磁珠法病毒核酸提取试剂盒的病毒保存液。

背景技术

现代医学检验中常常需要提取疑似样本中的核酸(DNA、RNA)来检测是否存在致病病毒。而受到时间或距离的限制，一般需要将待测样本保存一段时间，或送至特定的地点才能进行检测。

目前市场上已有病毒保存液可以满足以上需求，比如Hank’s液、PBS溶液，但是也存在一些缺陷：由于很多样本中病毒含量较少，经约3mL保存液稀释后，仅取最多200μL含样本的保存液经裂解液裂解后进行核酸提取，因此得到的核酸量很低，可能导致后续检测(如荧光定量PCR)呈阴性，影响病情的判断。此外，传统病毒保存液保存样本的时间较短，而且要求低温保存。

目前主流磁珠法病毒核酸提取试剂盒都是蛋白酶K加裂解液，如天根生化、诺维赞生物、海狸生物、美基生物等。在高浓度离子化剂条件下，硅基磁性粒子可通过氢键和静电吸附核酸，而蛋白质或其它杂质不被吸附而去除。吸附了核酸的纳米粒子经洗涤去除蛋白质和盐，最后可以用低盐缓冲液(如Buffer TE)或水洗脱出磁珠上的核酸。试剂盒提取样本量比较小，标准加样为200μL，原因在于常规的病毒保存采用Hank's液或PBS，加大样本量会稀析裂解液的盐浓度，导致核酸得率下降。同时当样本量不足200μL时，又要求用PBS补足体积，也会导致核酸得率较低。申请号202010128653.3公开了一种以硫氰酸胍为基础的样本保存液，但这类含硫氰酸胍的样本保存液会导致核酸提取试剂中的蛋白酶K失活及磁珠成团，最终导致核酸得率下降。

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种具有保存和裂解能力、可以室温保存及运输、能与各类磁珠法病毒核酸提取试剂盒兼容、安全性高的病毒保存液。

为了解决上述问题，本发明的病毒保存液包括：盐酸胍、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸、异丙醇或乙醇。

本发明病毒保存液中，优选盐酸胍的浓度为2～6mol/L、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐的浓度为10～100mmol/L、乙二胺四乙酸的浓度为2～5mmol/L、异丙醇或乙醇的体积百分比为5％～40％。

本发明病毒保存液中，进一步优选盐酸胍的浓度为3～5mol/L、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐的浓度为50～80mmol/L、乙二胺四乙酸的浓度为2.5～4mmol/L、异丙醇或乙醇的体积百分比为10％～30％。

本发明病毒保存液的pH值为6～9，优选pH值为7～8。

本发明病毒保存液是以无菌水为溶剂配制而成，具体配制方法为：将盐酸胍、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸、异丙醇或乙醇加入无菌水中，搅拌混合均匀。

本发明病毒保存液中的盐酸胍是蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核酸与核蛋白解离，后续核酸提取时可以少加或不加裂解液，此外，盐酸胍可以灭活RNA酶，避免RNA被降解；三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐是常用的缓冲试剂，可以保持保存液的稳定性，同时保持核酸稳定；乙二胺四乙酸是常用的金属离子螯合剂，具有抑制核酸酶活性的作用，有利于保持核酸稳定；异丙醇或乙醇起到沉淀、富集核酸的作用，有利于后续的核酸提取。