[发明专利]一种高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法

权利要求书

1.一种高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1） 原料预处理：

将河蚌肉去壳分离内脏和肉质部，将肉质部洗净、沥水、匀浆后分装备用；

（2） 破壁处理：

向经过预处理的河蚌肉匀浆液中加入蒸馏水，蒸馏水添加量与匀浆液质量按照1:1加入，蒸馏水添加量单位为mL，匀浆液质量单位为g；用破壁机处理后得到河蚌肉样品液，破壁机间歇式处理2-3min后分装备用；

（3） 高压脉冲电场处理：

向样品液中加入蒸馏水进行均质，蒸馏水添加量与样品液质量按照8:1加入，蒸馏水添加量单位为mL，样品液质量单位为g；调整蠕动泵流速为7mL/min，将均质液泵送至脉冲电场处理室进行高压脉冲电场处理，脉冲数10个，电场强度25kV/cm；

（4） 酶水解：

经脉冲电场处理后，调节均质液pH值为6.5，向均质液加入4000U/g酶制剂，将均质液在50℃水浴锅中进行水浴处理2.95h，水浴酶解完成后沸水灭酶，灭酶后冷却至室温；

（5） 去除蛋白质：

向酶解后样品液中加入沉淀剂Ⅰ：15.0g/100mL亚铁氰化钾溶液，沉淀剂Ⅰ添加量为2.5-3%v/v样品液，涡旋混合；再加入沉淀剂Ⅱ：30.0g/100mL乙酸锌溶液，沉淀剂Ⅱ添加量为2.5-3%v/v样品液，涡旋混合，混合后离心获取上清液；

（6） 过滤：

向上清液中加入活性炭，活性炭的添加量为2%-3%w/v上清液，静置，脱色过滤；

（7） 分离纯化：

将过滤液通入阳离子交换树脂柱，用蒸馏水洗脱，收集牛磺酸洗脱液；

（8） 结晶：

利用旋转蒸发仪将收集到的洗脱液浓缩到10%以下，加入无水乙醇，混合后放入4℃冰箱中，结晶析出，离心收集结晶，用蒸馏水溶解结晶，再加入无水乙醇，混合后放入4℃冰箱中重结晶，共结晶提取3-4次，得到高纯度的牛磺酸。

2.根据权利要求1所述的一种高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法，其特征在于：步骤（4）中，采用氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节处理液pH值；酶制剂为木瓜蛋白酶。

3.根据权利要求1所述的一种高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法，其特征在于：步骤（5）中，离心条件为5000r/min下离心10min。

4.根据权利要求1所述的一种高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法，其特征在于：步骤（8）中，每次结晶提取的过程中，无水乙醇添加量为溶液体积的4倍。