[发明专利]一种基于DNA条形码的枸杞快速鉴定方法

说明书

本发明公开了一种基于DNA条形码的枸杞快速鉴定方法，属于枸杞种属鉴定技术领域。本发明所述鉴定枸杞的DNA条形码基因序列为trnL‑trnF条形码，可对宁杞、黄果变枸杞、黑果枸杞、北方枸杞、大麻叶枸杞、中国枸杞、云南枸杞、蔓生枸杞、紫柄枸杞、红枝枸杞等品种进行鉴定。本发明提供的DNA条形码能够应用于构建枸杞系统发育树，进而用于枸杞种内和种间的系统发育的研究，为枸杞品种鉴定、分类和系统发育研究提供有效的依据。本发明同时基于该方法提供了枸杞样本的trnL‑trnF条形码数据库，通过将待鉴定样品的trnL‑trnF序列与所述枸杞样本trnL‑trnF条形码数据库中的序列进行比对，能够有效的对枸杞种属进行鉴定，并确定枸杞的种间关系，为枸杞品种的分类和鉴定提供有效的依据。

技术领域

本发明属于枸杞种属鉴定技术领域，具体涉及一种基于DNA条形码的枸杞快速鉴定方法。

背景技术

枸杞富含枸杞多糖、甜菜碱、类胡萝卜素、多种不饱和脂肪酸等多种有效成分，具有抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、增强免疫力、软化血管、降低血脂等功效，是中国重要的药食同源功能型特色植物资源。

枸杞育种在整体上与其他作物育种相比，还存在许多不足和缺陷，主要体现在以下几点:(1)实用生产型品种相对偏少，在生产中大面积推广应用的品种仅有宁杞1号、宁杞4号、宁杞5号和宁杞7号等4个新品种，并且其用途相对单一，不能很好地适应枸杞产业多元化发展的方向；(2)育种手段相对单一，育种周期长、速度慢。近年来，分子标记技术发展很快，对于深入了解植物基因的多态性、有针对性地选择亲本、对杂种后代进行早期鉴定等方面，都能提供更为有效的判断依据，从而提高育种效率。通过群体选优、杂交育种、细胞融合等技术，建立多样化育种理论体系和技术体系，培育多用途的枸杞新品种，对于提升枸杞产业的研究水平和枸杞产业可持续发展意义重大。

DNA条形码(DNA barcoding)是利用1个或少数几个DNA片段对目标物种进行识别和鉴定的一项新技术，它具有操作简便、准确性高、鉴定快速等特点，已成为现代生物分类学研究中引人关注的新方向和研究热点。近些年来，国内外学者对适合用于鉴定植物的DNA条形码基因序列进行了积极的探索与研究。

公开号为CN110229927A的发明专利《一种基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法及其应用》，提供一种基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法。所述鉴定黑果枸杞的DNA条形码基因序列为LRITS2(the second internal transcribed spacer，第二个核糖体RNA内转录间隔区)/LRpsbA-trnH(叶绿体基因psbA和trnH之间的一段非编码区)。所述鉴定黑果枸杞的DNA条形码序列LRITS2/LRpsbA-trnH可以同时应用或任选其中之一。本发明能高效、精准地鉴定黑果枸杞原料。防止类似的混淆品或伪品，同时，可用于果粉、果实碎末等的鉴定，为保障食品安全和消费者权益具有重要的应用价值和较大的社会效益。

文章《基于matK条形码序列鉴定枸杞属种质资源》，公开了通过DNA条形码技术，以matK基因为条形码编码序列对枸杞属种质资源10份试验材料进行鉴定分析，从而在分子水平上获得鉴定枸杞属植物的理论依据。首先利用ClustalX软件比对序列，然后用Mega7.0获得序列信息并比较序列间的差异，最后基于K2P模型构建系统发育树。matK序列总长为936bp，保守位点933个，变异位点3个，GC含量均值为33.3％，碱基转换颠换值为1.8，其系统发育树分成了两大支，黑果、黄果变和昌吉枸杞聚为一大支，其余品种聚为一大支，各分支内部均具有较高的自展支持率。因此，matK序列可以作为初步鉴定枸杞属植物的DNA条形码。

发明内容