[发明专利]一种石竹属花卉嫩芽的诱变方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用农杆菌诱导石竹属花卉芽变的方法及其应用。该方法利用不插入目的基因的农杆菌浸染植物嫩芽，来引起植物遗传性状的改变，该方法操作简单，突变范围大，在很短的时间内可获得嫩芽突变体，有效地克服了无性繁殖植物品种改良的障碍，对具有观赏价值的石竹属花卉无性繁殖的遗传改良有重要价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种石竹属花卉嫩芽的诱变方法及其应用。

背景技术

无性繁殖是指用植物营养器官的一部分和花芽、花药、雌配子体等材料进行无性繁殖。无性繁殖不涉及生殖细胞，不需要经过受精过程，直接由母体的一部分直接形成新个体，新个体与母体的基因完全相同，可以良好保持原品种的优良特性。但对于植物育种来说，良好保持原品种的特性确是一个不利因素，对于无性繁殖品种具有改良障碍。因此，目前迫切需要一种可以克服无性繁殖品种改良障碍的方法，加快育种速度，缩短育种周期。

诱变育种是植物育种的常用手段，主要包括物理诱变和化学诱变。物理诱变通常使用物理辐射中的各种射线，包括紫外线、X射线、γ射线、α射线、β射线等；化学诱变主要是通过化学物质和碱基接触起化学反应，通过DNA的复制使碱基发生改变而起到诱变作用，主要的化学诱变剂为亚硝基胍、乙基硫酸甲烷、5-氟尿嘧啶、2-氨基嘌呤、吖啶橙、吖啶黄等。物理诱变多使用各种射线，防护不当，对育种操作人员健康会有一定风险；化学诱变使用各种化学试剂，对环境具有一定的污染。目前急需一种对环境友好，操作安全的诱变方法来克服无性繁殖品种改良障碍，加快育种速度，缩短育种周期。

发明内容

本发明的目的在于提供一种石竹属花卉嫩芽的诱变方法，该方法操作简单，安全可靠，且不污染环境，在很短的时间内可获得嫩芽突变体，有效地克服了无性繁殖植物品种改良的障碍，对具有观赏价值的花卉无性繁殖的遗传改良有重要价值。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种石竹属花卉嫩芽的诱变方法，包括以下步骤：

1）取花卉嫩芽，剥去幼叶露出茎尖，在茎尖周围用解剖针扎出伤口；

2）将步骤1）得到的嫩芽浸入农杆菌菌液中在黑暗条件下进行震荡培养，所述农杆菌菌液的OD₆₀₀值为0.2~0.4，所述震荡培养的条件为：26~28℃、30~50rpm条件下震荡培养16~72h；

3）将步骤2）得到的嫩芽用清水冲洗，用头孢噻肟钠溶液浸泡处理，得诱变后的嫩芽。

优选的，所述石竹属花卉包括香石竹。

优选的，所述步骤3）头孢噻肟钠溶液的浓度为400~500mg/L，处理时间为4~8h。

优选的，所述步骤1）中嫩芽为1~10cm的嫩芽。

优选的，所述步骤2）中的农杆菌的种类包括AGL1、GV3101、LBA4404、EHA105和EHA101的一种或多种。

优选的，所述农杆菌未插入任何目的基因。

优选的，所述步骤2）中的农杆菌菌液为活化后的农杆菌菌液。

本发明还提供了上述诱变方法在花卉育种中的应用。

有益效果：

本发明提供的一种石竹属花卉嫩芽的诱变方法，首先在茎尖周围用解剖针扎出伤口，然后将嫩芽浸入农杆菌菌液中在黑暗条件下进行震荡培养，清水冲洗后，浸入头孢噻肟钠溶液，清洗后得诱变后的嫩芽。本发明利用农杆菌对花卉嫩芽进行诱导，不仅操作简单，在很短的时间内可获得嫩芽突变体，有效地克服了无性繁殖植物品种改良的障碍，对具有观赏价值的花卉无性繁殖的遗传改良有重要价值，而且本发明没有辐射，无有毒化学试剂，安全可靠，不污染环境，是一种新的诱导育种的方法。

附图说明