[发明专利]一种鉴定非洲猪瘟病毒的特异性引物及其鉴定方法与检测试剂盒

权利要求书

1.一种鉴定非洲猪瘟病毒的特异性引物，其特征在于，根据非洲猪瘟病毒的VP-72蛋白编码基因为模板如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示，设计特异性引物的序列为：

上游引物：5'-CGAGATTGGCACAAGTTCGGAC-3'；

下游引物:5'-AGTGAGTG--GGAATCTATCTGTATGGA-3'。

2.一种利用权利要求1所述特异性引物鉴定非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S10，提取样品猪血液中DNA，用如权利要求1所述的特异性引物以所述DNA为模板进行PCR扩增，若扩增出目的基因条带,则所述DNA中含有非洲猪瘟病毒,若无法扩增出目的基因条带,则所述DNA中不含有非洲猪瘟病毒，则检测结束，更换样品猪血液；

S20，将步骤S10中筛选得到的目的基因条带插入到载体中进行克隆，克隆成功的载体采用双酶切的方法鉴定并筛选阳性重组质粒；

S30，阳性重组质粒送去做目的基因测序，测序后与所述特异性引物序列以及VP-72蛋白编码基因序列对比，若对比结果同源性为100％，则证明扩增出的所述目的基因条带是非洲猪瘟病毒基因。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S10中，PCR体系的循环条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s；56℃退火30s；72℃延伸40s，36个循环；72℃延10min。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S10中，对特异性引物进行PCR鉴定，扩增条带与预期大小一致，标明所述特异性引物的特异性强。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S20中，将筛选出的阳性重组质粒进行涂板试验，菌落生产正常，则质粒构建成功。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S10中包含一种用于提取所述样品猪血液中的病毒基因组DNA的DNA提取试剂盒。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S20中包含一种用于筛选阳性重组质粒的质粒提取试剂盒。

8.一种用于鉴定非洲猪瘟病毒的试剂盒，所述试剂盒包含如权利要求1所述特异性引物。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为猪流行性腹泻病毒，猪塞内加谷病毒，口蹄疫病毒，猪德尔塔冠状病毒，猪库布病毒，猪博卡病毒或猪萨佩罗病毒中的一种或多种的cDNA。