[发明专利]一种病毒核酸的提取方法及其相关试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种病毒核酸的提取方法及其相关试剂盒。本发明提供一种病毒核酸的提取方法，包括：将待测样品置于裂解体系中进行孵育、裂解，所述裂解体系包括BSA、Carrier RNA和蛋白酶K。本发明所提供的病毒核酸的提取方法及其相关试剂盒，相对于现有的核酸提取方法来说，操作步骤更加简单、便捷，整个提取过程可以在很短的时间内完成，且仅有加样混匀、高温处理这几个步骤，无需反复敞开裂解体系，减少气溶胶扩散感染的风险，且无需配备高速离心机、核酸提取离心柱和磁性粒子等其他昂贵设备。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种病毒核酸的提取方法及其相关试剂盒。

背景技术

核酸提取是整个核酸检测技术流程的第一步，也是分子生物学中关键的方法之一。他是下游核酸检测和科学研究的基础，抽提的核酸的质量和其完整性会直接影响临床研究或诊断结果。核酸的提取一般包括两步：病毒的裂解和核酸的纯化。现阶段实验室检测指南并未明确提及或推荐新冠病毒标本的核酸提取方法，目前商品化的核酸提取方法主要是固相吸附法，其基本原理是利用核酸独特的物理性质，在特定条件下(如盐浓度，pH等)让核酸吸附在某种固相表面，然后进行清洗和洗脱得到纯化的核酸。此类方法首先利用离液剂(chaotropic agent，如盐酸胍，guanidinium chloride等)来破坏细胞、细菌和病毒的结构，抑制蛋白质和核酸酶对核酸的结合和裂解，从而释放得到游离的核酸。这样得到的核酸目前广泛使用两类方法进行固相吸附和纯化：1)离心柱法：用基于硅的材料或其它吸附核酸的固体填充在离心柱中。第一步生物体裂解得到的核酸通过离心柱时会吸附在填充介质上，再利用高盐乙醇溶液洗去杂质，最后利用低盐溶液，例如纯水，将核酸洗脱下来得到纯化的产品。该方法简单便捷，提取效率高，纯度好。缺点是需要商业提取试剂盒，相对高速的离心机，难以做到高通量和自动化，处理大量样品时工作量大，耗时长。2)磁珠法：使用微米或纳米级别大小的磁性粒子作为固相载体。磁性粒子表面包裹含硅材料或其它吸附核酸的材料。混入裂解得到的游离核酸中以后，利用外加磁场将吸附有核酸的磁性粒子分离出来并进行清洗和洗脱得到纯化的核酸。该方法操作较简单，可实现高通量和自动化操作，缺点是需购买商业试剂，成本较高，不同厂家、批次磁性粒子效果波动较大，同时提取步骤和时间还是较长。

这些方法在实际运用时都面临着一系列问题：1)操作繁琐，对测试员要求高；2)有多次重复开盖的操作，这样的操作增加了形成病毒气溶胶的机率，加大了测试员被感染的风险。此类临床样本的核酸提取需要在特定防护级别的专用实验室中进行，并要求操作者佩戴全套符合标准的防护装备，从而大大增加了核酸提取和分析的复杂性、成本和时间，也意味着此类操作不适合在小医院、诊所、社区及家庭环境下进行，不能用于快速、大规模的疾病筛查。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种病毒核酸的提取方法及其相关试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种病毒核酸的提取方法，包括：将待测样品置于裂解体系中进行孵育、裂解，所述裂解体系包括BSA、Carrier RNA和蛋白酶K。

在本发明一些实施方式中，所述待测样品选自咽部分泌物，优选选自咽拭子样品。

在本发明一些实施方式中，所述裂解体系中，BSA的浓度为0.3～0.7mg/mL。

在本发明一些实施方式中，所述裂解体系中，Carrier RNA的浓度为13.26～15.26μg/mL。

在本发明一些实施方式中，所述Carrier RNA的多核苷酸序列包括polyA序列，所述polyA序列的长度为300～2000bp。

在本发明一些实施方式中，所述裂解体系中，蛋白酶K的浓度为0.05～0.2mg/mL。

在本发明一些实施方式中，所述裂解体系为水溶液，优选为无酶水水溶液、DEPC水水溶液中的一种或多种的组合。