[发明专利]一种小鼠动脉粥样硬化动物模型及其建立方法

权利要求书

1.一种小鼠动脉粥样硬化动物模型，其特征在于，所述动物模型通过腺病毒系统性高表达可诱导小鼠低密度脂蛋白受体降解蛋白的表达得到。

2.一种权利要求1所述的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

步骤1、构建腺病毒表达载体Ad-IDOL；

步骤2、将步骤1得到的所述腺病毒载体通过尾部静脉注射到ApoE^-/-小鼠中，注射后采用高脂饲料喂养6周，第四周时再注射一次步骤1.5的腺病毒表达载体Ad-IDOL，6周后得到的小鼠即得到本发明的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型。

3.根据权利要求2所述的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤1中腺病毒表达载体具体构建步骤如下：

步骤1.1、采用Hind Ⅲ、SalⅠ双酶切IDOL cDNA质粒，电洗脱回收IDOL cDNA片段，HindⅢ、Sal Ⅰ双酶切p IDOL-CMV质粒，电洗脱法回收p AdTrack-CMV Hind Ⅲ和Sal Ⅰ双酶切线性片段，再通过T4DNA连接酶连接IDOL cDNA片段与p AdTrack-CMV Hind Ⅲ、Sal I双酶切线性片段，将连接得到的产物转化到E.coliDH5α感受态细胞中，经Kan⁺LB培养基培养后采用碱裂解法提取重组质粒；

步骤1.2、将步骤1.1所得的p AdTrack-IDOL重组质粒经Pem Ⅰ酶切，电洗脱回收线性片段，将酶切后的p AdTrack-IDOL Pem Ⅰ酶切线性片段电转法转入含p AdEasy-1的E.coliBJ5183电感受态细胞，转化产物经Kan⁺LB固体培养基培养后采用碱性裂解法提取pAdEasy-IDOL重组质粒；

步骤1.3、采用Pac Ⅰ酶切步骤1.2所得的p AdEasy-IDOL得到Pac I线性化重组质粒pAdEasy-IDOL片段，采用5μg的Pac Ⅰ线性化重组质粒p AdEasy-IDOL片段转染HEK293细胞，转染后培养HEK293细胞7～10天，每天观察HEK293细胞生长及HEK293细胞中绿色荧光蛋白出现的情况，当HEK293细胞中绿色荧光蛋白表达呈“彗星”状并出现细胞病变效应时，收集HEK293细胞并涡旋震荡4次使细胞裂解，裂解后在12000r/min的条件下离心3min，收集上清液即为AD-IDOL病毒液，将AD-IDOL病毒液于-80℃保存备用；

步骤1.4、感染当天，将200μL所述步骤1.3得到的AD-IDOL病毒液加至1.5mL DEME完全培养液中培养90min后，加入3.5mL的DMEM完全培养液培养，感染第3天，细胞出现明显细胞病变效应并伴有脱落时，收集病毒，再重复感染AD-IDOL病毒液4次，将所得的病毒总和进行收集即为本发明的腺病毒表达载体Ad-IDOL。

4.根据权利要求3所述的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤1.3中转染前1天将HEK293细胞于直径为60mm的培养皿培养，转染时HEK293细胞的细胞密度30％-50％。

5.根据权利要求3所述的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤1.4中感染前1天，将HEK293细胞于直径为100mm的培养皿，感染时HEK293细胞的细胞密度75％-85％。

6.根据权利要求2所述的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤2中高脂饲料的胆固醇和脂肪量为1.5％cholesterol+15％fat。

7.根据权利要求2所述的一种小鼠动脉粥样硬化动物模型的建立方法，其特征在于，所述步骤2中注射入ApoE^-/-小鼠的腺病毒表达载体Ad-IDOL的浓度是1×10¹¹vp/mL。