[发明专利]用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸及制备方法

权利要求书

1.一种用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，包括：样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板；所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次搭接粘贴在底板上；其中，金标垫上吸附有胶体金标记的鸭瘟病毒UL2蛋白、胶体金标记的鸭瘟病毒gI蛋白和胶体金标记的山羊抗兔IgG；硝酸纤维素膜上含有T1线、T2线和C线，T1线上含有鸭瘟病毒UL2蛋白，T2线上含有鸭瘟病毒gI蛋白，C线上含有兔IgG。

2.根据权利要求1所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，鸭瘟病毒UL2蛋白在硝酸纤维素膜上的包被浓度为0.5-2.5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，鸭瘟病毒gI蛋白在硝酸纤维素膜上的包被浓度为0.5-2.5mg/ml。

4.根据权利要求1所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，胶体金标记的鸭瘟病毒UL2蛋白的浓度为50-250μg/ml；胶体金标记的鸭瘟病毒gI蛋白的浓度为50-250μg/ml；胶体金标记的山羊抗兔IgG的浓度为20-40μg/ml。

5.根据权利要求1或4所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，胶体金标记的鸭瘟病毒UL2蛋白通过以下方法制得：将胶体金溶液和碱性溶液混合，调节胶体金溶液pH值至蛋白质等电点，然后加入鸭瘟病毒UL2蛋白，混匀，制得。

6.根据权利要求1或4所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，胶体金标记的鸭瘟病毒gI蛋白通过以下方法制得：将胶体金溶液和碱性溶液混合，调节胶体金溶液pH值至蛋白质等电点，然后加入鸭瘟病毒gI蛋白，混匀，制得。

7.根据权利要求1或4所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，胶体金标记的山羊抗兔IgG通过以下方法制得：将胶体金溶液和碱性溶液混合，调节胶体金溶液pH值至蛋白质等电点，然后加入山羊抗兔IgG，混匀，制得。

8.根据权利要求1所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，金标垫通过以下方法制备得到：将玻璃纤维素膜浸于含50-250μg/ml的胶体金标记的鸭瘟病毒UL2蛋白、50-250μg/ml的胶体金标记的鸭瘟病毒gI蛋白和20-40μg/ml的胶体金标记的山羊抗兔IgG的混合溶液中，于37℃干燥过夜，制得。

9.权利要求1-8任一项所述的用于鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将鸭瘟病毒UL2蛋白、gI蛋白和兔IgG分别划线于硝酸纤维素膜上，形成T1、T2线和C线，然后将硝酸纤维素膜置于37℃干燥2h；

(2)将样品垫、金标垫、步骤(1)处理后的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘连在底板上，硝酸纤维素膜上的T1线靠近金标垫，T2线靠近吸水纸，C线位于检测线T1和T2的中间，然后将其切割成试纸条，制得。

10.采用权利要求1-8任一项所述的胶体金免疫层析试纸鉴别鸭瘟弱毒疫苗免疫和野毒感染的方法，其特征在于，包括：将血清样品经加样孔滴加在样品垫上，根据T1、T2线和C线上的显色结果判定血清样品来自鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭或野毒感染鸭；

当T1、T2线和C线均显色时，说明该血清样品来自野毒感染鸭；

当只有T2线和C线显色时，说明该血清样品来自鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭；

当只有C线显色时，说明该血清样品来自健康鸭；

若C线不显色，则试纸条失效。