[发明专利]涎腺腺样囊性癌神经侵袭PDX模型的构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种涎腺腺样囊性癌神经侵袭PDX模型的构建方法和应用。构建方法包括临床离体肿瘤样本处理、PDX模型构建、神经侵袭PDX模型评估。旨在通过建立标准化SACC神经侵袭PDX模型库，对SACC嗜神经侵袭特性及机制进行全面分析评估，对于SACC新干预靶点的发现与验证研究、共临床试验和个性化治疗具有积极意义。

技术领域

本发明涉及生物技术及医学领域，具体涉及涎腺腺样囊性癌(SACC)神经侵袭PDX模型的构建方法和应用。

背景技术

PDX(patient-derived xenografts)模型是一种将肿瘤患者的新鲜肿瘤组织移植至SPF级模型小鼠体内，并依靠小鼠提供的环境生长的一种异种移植模型。该模型稳定地保留了原代肿瘤的遗传特性、组织学和表型特征，肿瘤的生长微环境也更接近实际情况。

目前已有将SACC肿瘤细胞系移植到裸鼠体内而构建的CDX肿瘤模型，但尚无建成的SACC神经侵袭PDX模型。当前CDX模型应用存在诸多弊端，一方面，由于肿瘤细胞系是经过人工纯化以及多代培养的细胞系，已经无法保持肿瘤组织的异质性。另一方面，由于经过了多次的传代，肿瘤细胞系生物学特征变化明显，使其药效评价结果与临床相似度极低。

SACC是一种常见的唾液腺恶性肿瘤，浸润性极强，具有嗜神经侵袭特性，这一特性常导致患者出现疼痛、面瘫、舌麻木等神经受损症状，并与其术后复发、预后及转归紧密相关。由于SACC肿瘤样本量相对常见恶性肿瘤较少，加之PDX模型构建成功率低，故SACC神经侵袭PDX模型建立存在一定难度。

发明内容

本发明目的在于，提供一种涎腺腺样囊性癌神经侵袭PDX模型的构建方法和应用，对SACC临床前期评估、治疗和预后提供指导，特别是对于肿瘤的个体化诊断和治疗具有不可代替的价值。

本发明通过下述方案实现：

一种涎腺腺样囊性癌神经侵袭PDX模型的构建方法，包括以下步骤：

(1)准备模型小鼠；

(2)临床标本筛选，获取SACC新鲜离体肿瘤组织；

(3)离体肿瘤组织预处理；

(4)将所述离体肿瘤组织植入模型小鼠坐骨神经周。

作为本发明的进一步改进，步骤(1)中，所需模型小鼠为鼠龄5-8周雌性NSG小鼠。

作为本发明的进一步改进，步骤(2)中，所述的临床标本筛选为SACC非复发病例，术前未经放化疗，离体组织获取部位为去除坏死部位的纯肿瘤区域。

作为本发明的进一步改进，步骤(3)中，所述离体肿瘤组织预处理为将手术切除的新鲜肿瘤组织立即放入培养基中低温保存，之后在无菌条件下将肿瘤组织制备成适当大小备用。

作为本发明的进一步改进，步骤(4)中，非手术方法是指将肿瘤组织预先制备成一定形状的结构，用穿刺针获取后应用B超引导注射技术植入模型小鼠坐骨神经周。

本发明步骤(1)中，所述的实验小鼠为获得相关组织认可，按SPF级要求管理的鼠龄5-8周的雌性NSG小鼠。NSG小鼠是T、B、NK细胞三联免疫缺陷，同时其巨噬细胞功能、补体溶血活性等均下降，是目前国际公认的免疫缺陷程度高、非常适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。研究表明PDX模型经过传代后仍能保持原代肿瘤的异质性，更有利于减少了机体免疫对外来移植物的筛选作用，避免了原发肿瘤某些表型的缺失。

本发明步骤(2)中，所述的临床标本筛选为SACC非复发病例，术前未经放化疗，离体组织获取部位为已去除坏死部位的纯肿瘤区域。