[发明专利]一种基于荧光和拉曼双信号增强的肠毒素光谱分析方法有效

专利信息
申请号: 202010587142.8 申请日: 2020-06-24
公开(公告)号: CN111624186B 公开(公告)日: 2021-03-16
发明(设计)人: 赵媛;施丽霞 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: G01N21/64 分类号: G01N21/64;G01N21/65
代理公司: 无锡华源专利商标事务所(普通合伙) 32228 代理人: 聂启新
地址: 214122 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 基于 荧光 拉曼双 信号 增强 毒素 光谱分析 方法
【权利要求书】:

1.一种基于荧光和拉曼双信号增强的肠毒素光谱分析方法,其特征在于,所述的分析方法具体包括以下步骤:将长余辉纳米粒子进行表面肠毒素抗体修饰得到ZGGO:Cr,Er,Yb/SEC-1溶液,与金锥纳米粒子进行表面肠毒素抗体修饰得到的Au NBPs@4-ATP/SEC-2溶液混合,随后加入肠毒素SEC,混均,分别测定溶液荧光光谱以及拉曼光谱,所述分析方法的具体步骤如下:

(1)长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs的制备及表面SEC-1的修饰:

①长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs的制备:

将Cr(NO3)2,Zn(NO3)2,Yb(NO3)2,Er(NO3)2与锗酸铵溶液加入到Ga(NO3)2溶液中,混匀后得到溶液1,随后向溶液1中加入CTAB,调节溶液的pH值至7-9,混均后进行水热反应,在110-130℃下加热14-16h;冷却至室温后,固液分离取沉淀物,洗涤并干燥即得长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs;

②长余辉纳米粒子ZGGO:Cr,Er,Yb NPs的氨基化:将上述所得ZGGO:Cr,Er,Yb NPs分散于NaOH溶液中,混均后固液分离取沉淀,并将其分散在N,N-二甲基甲酰胺试剂中,然后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES试剂,在75-85℃水浴中加热,待反应结束后固液分离取固相,并将固相分散在水中,得到氨基化ZGGO:Cr,Er,Yb NPs溶液;

③长余辉纳米粒子表面肠毒素抗体(SEC-1)修饰:将戊二醛和NaBH4溶液加入到氨基化ZGGO:Cr,Er,Yb NPs溶液中并搅拌,之后固液分离并洗涤沉淀物,将沉淀物用PBS缓冲溶液复溶,加入SEC-1溶液,振荡孵育,离心并用BSA溶液重悬产物,室温下保存4-5h,反应结束后收集沉淀物并用水清洗,最后将沉淀物重新均匀分散在PBS缓冲溶液中,反应结束后即得ZGGO:Cr,Er,Yb/SCE-1溶液;

(2)金锥纳米Au NBPs溶液的制备及表面SEC-2的修饰:

①金锥纳米Au NBPs溶液的制备:首先向HAuCl4,十六烷基三甲基氯化铵CTAC,柠檬酸溶液中加入NaBH4溶液,室温搅拌1-3min;将溶液在75-85℃油浴中加热搅拌85-95min得到金种溶液,向CTAB、HAuCl4、AgNO3、HCl与AA抗坏血酸的混合溶液中加入上述金种溶液,并孵育1.8-2.2h得到金锥纳米Au NBPs溶液;

②Au NBPs@4-ATP的制备:向金锥纳米Au NBPs溶液中加入4-ATP溶液,反应结束后固液分离取固相并用水洗涤,将固相溶解在水中得到Au NBPs@4-ATP溶液;

③表面肠毒素抗体SEC-2的修饰:将用TBE缓冲液稀释的肠毒素抗体SEC-2加入AuNBPs@4-ATP溶液进行反应,待反应结束后固液分离取沉淀物,用BSA溶液重悬沉淀物,室温下保存2-3h,封闭未结合抗体的结合位点;反应结束后离心收集沉淀物并用水洗涤,最后将沉淀物重新分散在PBS缓冲溶液中,即得Au NBPs@4-ATP/SEC-2溶液;

(3)荧光拉曼双重光谱分析方法的构建:

将Au NBPs@4-ATP/SEC-2溶液与配制好的SEC标准溶液混合,室温下孵育5-6h;之后加入ZGGO:Cr,Er,Yb/SEC-1溶液,室温下孵育5-6h;反应结束后用250-260nm紫外灯照射,测试每组溶液的发光光谱,得到以SEC浓度对数为横坐标,以检测探针ZGGO:Cr,Er,Yb/SEC-1的发光恢复程度F-F0纵坐标的标准曲线;测试每组溶液的拉曼光谱,得到以SEC浓度对数为横坐标,以检测探针Au NBPs@4-ATP/SEC-2的拉曼信号变化程度I-I0为纵坐标的标准曲线,其中所述F代表有肠毒素时的荧光强度;I代表有肠毒素时的拉曼强度;F0代表没有肠毒素时的荧光强度;I0代表没有肠毒素时的拉曼强度。

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