[发明专利]一种改良型特异性生长因子检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种改进型特异性生长因子检测试剂盒，属于生物化学技术领域。所述的试剂盒包括R1试剂、R2试剂和校准品，其中R1试剂主要为缓冲液成分，R2试剂主要为反应液。本发明的试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，且对肿瘤样本的检测具有早期性和广谱性，可适用于多种肿瘤的早期筛查。

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种改良型特异性生长因子检测试剂盒，及其在肿瘤样本检测中的应用。

背景技术

特异性生长因子(TSGF)是不同于其他肿瘤标志物的一类独立物质，是恶性肿瘤形成和生长时促使肿瘤及其周边毛细血管大量增殖并释放到外周血液中的一系列因子的总称。这些因子是肿瘤通过自分泌和旁分泌的方式产生的，主要由糖类物质(如糖脂、糖蛋白、寡聚糖等)构成，包括表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、肿瘤生长因子α和β(TGF-α、TGF-β)，人骨骼生长因子(HSGF)以及促血管生成素(ANG)等。

当肿瘤产生时，血液中TSGF含量升高，是肿瘤的早期发现、术后及放、化疗、转移、复发的重要标志。临床试验证明，测定血清中TSGF的含量，将为肿瘤的筛查、早期辅助诊断、疗效评价，以及复发监测提供有效的参考依据。目前，市场上TSGF的检测产品种类有限，而且测定准确度还有待提高。

发明内容

为此，需要提供一种准确度高、操作简便的TSGF检测试剂盒。

为实现上述目的，发明人提供的技术方案如下：

一种改良型特异性生长因子检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和校准品；所述的R1试剂为缓冲液，包括磷酸盐缓冲液；所述的R2试剂为反应液，包括显色剂或者胶乳微球；所述的校准品的成分包括表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生生长因子、肿瘤生长因子α、肿瘤生长因子β、促血管生成素，以及人骨骼生长因子其中的一种或多种。

所述的R1试剂包括以下组分：磷酸盐1.0-3.5g/100mL，乙二胺四乙酸二钠0.5-0.8g/100mL，Proclin3000.05-0.5g/100mL，氯化钠0.3-1.2g/100mL。

进一步的，所述的R1试剂还包括硫酸乙酰肝素0.1-1.0g/100mL与聚乙二醇60000.5-1.5g/100mL其中的一种。

所述的R2试剂包括以下组分：显色剂0.01-0.15g/100mL，Proclin3000.05-0.5g/100mL，枸橼酸0.5-1.5g/100mL，甘油0.1-0.5mL/100mL。此原理是利用硫酸乙酰肝素特异性结合特异性生长因子形成复合物A，反应剩余的硫酸乙酰肝素与显色剂结合生成复合物B，导致溶液中显色减弱，从而间接反映特异性生长因子的水平。

进一步的，所述的显示剂包括天青I、中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝，以及灿烂甲酚蓝其中的一种。

所述的R2试剂包括以下组分：抗碱性成纤维细胞生长因子抗体偶联的胶乳微球0.01-0.03g/100mL，抗肿瘤生长因子β抗体偶联的胶乳微球0.01-0.03g/100mL，Proclin3000.05-0.5g/100mL，柠檬酸0.5-1.5g/100mL，甘油0.1-0.5mL/100mL，BSA0.2-1.0g/100mL。此原理是利用肿瘤相关生长因子等抗原与偶联有单克隆抗体的胶乳微粒发生凝集反应，形成抗原-抗体复合物，从而反应特异性生长因子的水平。

所述的校准品的配方优化为：碱性成纤维细胞生长因子1.7-1.8g/100mL，肿瘤生长因子β1.4-1.6g/100mL，人骨骼生长因子0.5-0.6g/100mL，Proclin3000.05-0.5g/100mL，小牛血清10mL/100mL。

进一步的，所述的改良型特异性生长因子检测试剂盒在肿瘤样本检测中的应用。