[发明专利]一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物，其特征在于，包括：

第一引物探针组，包括正向引物ORF1ab-F，探针ORF1ab-P和反向引物ORF1ab-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1～3所示；

第二引物探针组，包括正向引物N-F，探针N-P和反向引物N-R，其核苷酸序列分别如SEQID No.4～6所示；

第三引物探针组，包括正向引物Rpp30-F，探针Rpp30-P和反向引物Rpp30-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.7～9所示。

2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物，其特征在于，所述探针ORF1ab-P、探针N-P和探针Rpp30-P的5’端标记有荧光基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red和CY3中的至少1种。

4.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒核酸检测引物探针组合物，其特征在于，所述荧光淬灭基团选自MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3和TAMRA中的至少1种。

5.一种包含如权利要求1-4任一所述的引物探针组合物的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，包括引物探针组合物容器，内外质控容器，逆转录反应和PCR扩增反应容器，所述引物探针组合物容器内含有核苷酸序列如SEQ ID No.1～9所示的引物探针干粉或者溶液；所述内外质控容器内含有核苷酸序列如SEQ ID No.10～12所示的干粉或者溶液；所述逆转录反应和PCR扩增反应容器包括逆转录酶、DNA聚合酶、辅助增强剂和缓冲液。

6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液的pH值控制在7.5～9.5。

7.根据权利要求5所述的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照组和阴性对照组，所述阳性对照组为新型冠状病毒COVID-19核酸或者假病毒颗粒；所述阴性对照组为人源性样本管家基因假病毒颗粒。

8.一种采用如权利要求1-4任一所述的引物探针组合物进行新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，用于非诊断目的，包括以下步骤：

(1)对新型冠状病毒样本进行核酸提取、纯化，得核酸提取液；

(2)以核酸提取液为模板，建立包含所述引物探针组合物的荧光定量PCR体系；

(3)通过荧光定量PCR检测系统对含模板的PCR反应混合液进行检测，根据得到的不同荧光信号数据判断患者是否感染新型冠状病毒。

9.根据权利要求8所述的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述荧光定量PCR体系包括新型冠状病毒ORF1ab、N基因和人源性样本管家基因的引物探针混合液。

10.根据权利要求8所述的新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，所述人源性样本管家基因选自Rnase P的蛋白亚单位Rpp 20、Rpp30、Rpp40，GAPDH和β-actin中的至少1种。