[发明专利]针对硫氧还蛋白的抗体、缀合物和检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种针对硫氧还蛋白的抗体、缀合物和检测试剂盒，涉及抗体技术领域。本发明公开的抗体或其功能性片段包括重链互补决定区和轻链互补决定区。本发明公开的抗体或其功能性片段能够与硫氧还蛋白特异性结合，具有较好的结合活性和亲和力，该抗体或其功能性片段的用途广泛，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种针对硫氧还蛋白的抗体、缀合物和检测试剂盒。

背景技术

硫氧还蛋白(Thioredoxin，Trx)是一类已知存在于所有生物体中的氧化还原小蛋白。它在许多重要的生物过程中发挥作用，包括氧化还原信号。它是一种通过半胱氨酸硫醇-二硫键交换促进其他蛋白还原而起抗氧化剂作用的蛋白质，分子量12kD的氧化还原酶。它无处不在，存在于从植物、细菌到哺乳动物的许多生物体中。

硫氧还蛋白在氨基酸序列水平上的特征是在CXXC基序中存在两个邻近的半胱氨酸。这两种半胱氨酸是硫氧还蛋白还原其他蛋白的关键。硫氧还蛋白还具有一种称为硫氧还蛋白折叠的特征性三级结构。硫氧还蛋白-1通过其活性中心二硫醇可逆氧化成二硫化物，参与氧化还原反应中的氢供体，伴随着2个电子和2个质子的转移。它涉及许多细胞过程，包括脱氧核糖核苷酸合成，氧化损伤蛋白的修复，蛋白质折叠，硫代谢和氧化还原稳态。硫氧还蛋白依赖性酶包括磷酸腺苷-磷酸硫酸还原酶MET16，烷基-氢过氧化物还原酶DOT5，硫氧还蛋白过氧化物酶TSA1和TSA2，烷基氢过氧化物还原酶AHP1和过氧化还原酶HYR1。硫氧还蛋白还参与保护免受减轻压力。作为LMA1复合物的一部分，它参与促进囊泡融合，例如同型液泡和ER衍生的COPII囊泡与高尔基体的融合。

随着分子克隆技术的普通应用，大量有价值的蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，这些蛋白在大肠杆菌中表达后，往往以不溶性的包涵体形式存在。包涵体的形成能有效抵抗细胞内的蛋白质水解作用，致使重组蛋白大量富集，通过高速离心等简单操作可以得到较纯的包涵体，利于纯化。然而，为获得可溶的活性蛋白，必须将包涵体内的蛋白变性溶解后复性，重新折叠成有活性的可溶性蛋白。这个过程通长耗时长，且回收率低，且有些蛋白本身复性就非常困难。分析真核生物蛋白在大肠杆菌中表达易形成包涵体的原因，其中之一是由于大肠杆菌和真核细胞的还原状态存在差异，影响了蛋白质之间的相互作用与多肽的正确折叠，异常的二硫键形成使蛋白易发生凝聚。大肠杆菌的Trx具有催化蛋白质二硫键还原的功能，可以帮助蛋白质正确折叠，这样对于复性困难的蛋白质，串联表达Trx就避开了包涵体复性的难题。

因此，基于Trx的上述特性及功能，它常作为分子伴侣构建可溶性表达系统，在基因工程上具有重要价值。对于可溶性较差，空间结构依赖性比较强的重组蛋白抗原，如艾滋病毒抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、丁型肝炎病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、庚型肝炎病毒抗原、风疹病毒抗原、人巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原、狂犬病毒抗原、人类T淋巴细胞白血病病毒抗原、登革热病毒抗原、人乳头瘤病毒抗原、西尼罗河病毒抗原、森林脑炎病毒抗原、麻疹病毒抗原、流感病毒抗原、副流感病毒抗原、水痘病毒抗原、艾柯病毒型抗原、柯萨奇病毒抗原、乙型脑炎病毒抗原、柯萨奇病毒抗原、EB病毒抗原、腮腺炎病毒抗原、梅毒螺旋体抗原、包柔氏螺旋体抗原、沙眼衣原体抗原、肺炎衣原体抗原、鹦鹉热衣原体抗原、解脲脲原体抗原、肺炎支原体抗原、结核分枝杆菌抗原、幽门螺旋杆菌抗原、淋球菌抗原、疟原虫抗原、枯氏锥虫抗原和弓形虫抗原等，在克隆构建过程中引入Trx蛋白，使Trx蛋白与重组蛋白抗原融合表达，可以有助于重组蛋白抗原的可溶性表达以及正确空间折叠。在诊断试剂中，当上述重组蛋白抗原直接被标记HRP、吖啶脂、胶体金等可被检测的标记物时，多数重组蛋白抗原会出现标记失活现象。对此，本领域提出了间接标记的方法，通过抗Trx蛋白的抗体间接地将HRP、吖啶脂、胶体金等可检测标记物标记在重组蛋白抗原上，有效避免标记失活，同时大大降低了假阳反应。

上述间接标记的方法建立在特异性单抗的基础上，需要针对Trx蛋白的特异性单克隆抗体。目前用于Trx蛋白的单克隆抗体灵敏度、特异性以及亲和力上都存在一些缺陷，还有较大的改善空间，本领域对于Trx蛋白的单克隆抗体的仍然存在着强烈需求。