[发明专利]一种基于反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法

说明书

本发明公开了一种基于反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法，包括如下参数：色谱柱：C18柱；流动相A相：由甲醇‑四氢呋喃‑水按体积比8:2:90混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的4‑氟‑DL‑苯丙氨酸，临用现配；流动相B相：由甲醇‑四氢呋喃‑水按体积比35:5:60混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的4‑氟‑DL‑苯丙氨酸，临用现配；洗脱方式：梯度洗脱；流动相流速：0.9mL/min；柱温：30℃。本发明只需要常规的C18反相硅胶柱即可有效分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体，无需手性色谱柱，成本低。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种基于反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法。

背景技术

二氢杨梅素(Dihydromyricetin，DMY)是一种二氢黄酮醇类化合物，存在于多种天然植物中，具有多种生物活性。二氢杨梅素含有两个手性中心，植物来源以(2R,3R)-DMY为主，但在高温、重结晶或存在金属离子等时，天然的(2R,3R)-DMY容易发生消旋化，形成(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY的混合物。(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY化学结构式如下。

由于(2R,3R)-DMY的生物活性显著优异于(2S,3S)-DMY，为了提高(2R,3R)-DMY的质量标准研究，控制(2R,3R)-DMY产品中(2S,3S)-DMY的含量，有必要建立一种分离(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY的方法。

阮丽君等提供了一种HPLC测定二氢杨梅素手性异构体含量的方法，但是，该方法采用了EnantioPakAD手性柱才将二者分离(HPLC测定二氢杨梅素手性异构体含量方法学研究，今日药学2019年12月第29卷第12期)。因为EnantioPakAD手性柱较为昂贵，且使用寿命短，所以阮丽君等提供的方法显然成本高。

手性流动相色谱法是一种采用添加了手性试剂的流动相进行手性异构体(对映体)分离的色谱技术。该方法使用普通填料的色谱柱即可实现手性异构体(对映体)的分离，成本低。

目前未见手性流动相色谱法成功用于(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY的报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中存在的缺陷和不足，提供一种基于反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法。

实现上述目的的技术方案如下：

一种基于反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法，包括如下HPLC色谱参数：

色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相A相：由甲醇-四氢呋喃-水按体积比8:2:90混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的4-氟-DL-苯丙氨酸，临用现配；

流动相B相：由甲醇-四氢呋喃-水按体积比35:5:60混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的4-氟-DL-苯丙氨酸，临用现配；

洗脱方式：梯度洗脱；

洗脱程序：0→10min，0％B→45％B；10→20min，45％B；20→25min，45％B→0％B；25→30min，0％B；

流动相流速：0.9mL/min；

柱温：30℃。

根据上述的基于反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法，色谱柱优选DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)。

根据上述反相HPLC分离二氢杨梅素和其(2S,3S)手性异构体的方法，检测波长为290nm。