[发明专利]用于早佳丝瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法

权利要求书

1.一种用于早佳丝瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物，其特征在于，所述引物包括上游引物SF32和下游引物SR32，所述上游引物SF32的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物SR32的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种早佳丝瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取早佳丝瓜亲本以及杂交种后代基因组DNA；

(2)以所述步骤(1)提取的基因组DNA为模板，使用权利要求1所述引物SF32和SR32进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)对步骤(2)所述扩增产物采用凝胶电泳检测，显色，统计电泳结果；

(4)对步骤(3)所述电泳结果进行分析，同时具有亲本特异性条带的单株为杂交种，缺少其中任意一条带则为假杂种。

3.根据权利要求2所述的一种早佳丝瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中基因组DNA的提取方法具体为：将待提取样品放入PCR板中，并加入0.25mol/L的NaOH溶液50μl，沸水中煮3min，用镊子取出PCR板，加入0.1mol/L pH＝8.0的Tris﹒HCl 150μl中和反应。

4.根据权利要求2所述的一种早佳丝瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR反应体系为10μl，其中：10ng/μl基因组DNA 0.5μl，10×PCR Buffer 1μl，10mmol/l dNTP 0.1μl，20pmol/l SSR上下游引物各0.1μl，2.5U/μlrTaq DNADNA聚合酶0.1μl，加灭菌ddH₂O至总体积10μl。

5.根据权利要求2或4所述的一种早佳丝瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性30s，52.5℃退火30s，72℃延伸30s，共25个循环，最后72℃延伸3min。

6.根据权利要求2所述的一种早佳丝瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(3)中凝胶电泳为8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

7.根据权利要求2所述的一种早佳丝瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(3)中显色具体为：电泳结束后，分开两块玻璃板，将凝胶放在专用盆中，加入蒸馏水清洗2-3遍后，放入染色液中，染色完成后取出胶板，用蒸馏水漂洗2-3次；将胶板放入显影液中，轻轻摇动，待条带清晰后，迅速用蒸馏水漂洗2-5遍后将胶板置于胶片观察灯上，拍照记录。

8.如权利要求1所述的SSR引物SF32和SR32在早佳丝瓜杂交种纯度鉴定及分子辅助育种中的应用。