[发明专利]CTHRC1在肝硬化诊断和治疗中的应用

说明书

本发明在肝硬化/纤维化领域首次提出利用检测CTHRC1基因及其产物，实现早期检测以及治疗肝硬化/纤维化的效果。本发明通过免疫组化实验、体内实验以及体外实验发现CTHRC1基因：在人肝硬化组织中表达上调，其参与调节肝纤维化的进展；有加剧肝纤维化进展的作用，能够加速肝功能损伤；可以加速肝星状细胞的活化，促进星状细胞的运动和收缩。然而使用CTHRC1中和抗体，针对CTHRC1进行阻断后，可逆转CTHRC1的作用，在动物体内使用CTHRC1中和抗体后，可以很大程度上减缓肝纤维化病变的进展。综上可见，CTHRC1具有成为良好的生物标记的潜应用前景。

技术领域

本发明涉及分子生物学特别是基因诊断和治疗领域，尤其是CTHRC1基因在肝硬化诊断和治疗中的应用。

背景技术

肝硬化，其前期病变表现为肝纤维化，是十分常见的肝脏慢性疾病^[1]。多数肝纤维化患者经过15到20年的时间后会转变为不可逆转的肝硬化，甚至会进一步发展为肝癌^[2]。肝纤维化的的病理表现为肝脏内纤维结缔组织的过度沉积(如Collagen)，是纤维增生(Fibrogenesis)和纤维分解(Fibrolysis)不平衡的结果。在肝纤维化进程中，肝星状细胞的活化是肝纤维化的中心事件。不同于肝癌，肝硬化的早期诊断十分困难，目前没有明确的分子标志物，临床检测手段主要是采用肝穿刺活检来进行诊断，其次是根据肝脾肿大、腹腔积液以及肝硬化并发症(如上消化道出血、肝性脑病、肝肾综合症等)这些临床病理特征来进行诊断^[3]。但已有的检测手段存在一定缺陷，活检对于病人来说有一定创伤，而以并发症为依据又很难诊断出早期肝硬化。因此，寻找简便易行且能够准确监测病情的分子标志物的意义重大。

CTHRC1是一种分子量大约为26KDa的分泌性糖蛋白，最初发现于球囊扩张动脉损伤大鼠模型研究中^[4]。CTHRC1参与了血管重构，并在胰腺癌组织中高表达^[5]。此外，CTHRC1在乳腺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤以及结肠癌中呈高表达，并且促进上述肿瘤的侵袭迁移^[6-8]。在血管平滑肌细胞中，CTHRC1抑制TGF-β通路，但是对内皮细胞的TGF-β通路没有抑制作用^[9]。CTHRC1基因的启动子结合区域有Smad的结合位点，这提示了CTHRC1可以受到TGF-β的调节^[8]。在胃癌的研究中发现，加TGF-β1处理后，胃癌细胞的CTHRC1表达水平逐渐上调，伴随着TGF-β下游Smad信号通路的活化^[8]。CTHRC1可以通过与Wnt5a和ROR2相互作用来激活Wnt/PCP信号通路，抑制Wnt/β-catenin信号通路，从而发挥调节细胞骨架重排和细胞运动的功能^[10]。所以，CTHRC1对于TGF-β和Wnt信号通路具有非常重要的调节作用。

我们通过免疫组化实验发现，CTHRC1基因在人肝硬化组织中表达上调，可能参与调节肝纤维化的进展。我们进一步通过体内实验证实CTHRC1具有加剧肝纤维化进展，加速肝功能损伤的作用。之后通过体外实验发现CTHRC1可以加速肝星状细胞的活化，促进星状细胞的运动和收缩，而使用CTHRC1中和抗体针对CTHRC1进行阻断后，可逆转CTHRC1的作用。在动物体内使用CTHRC1中和抗体后，可以很大程度上减缓肝纤维化病变的进展。

发明内容

本发明的目的是提供与CTHRC1基因或产物相关的肝硬化/纤维化检测和治疗药物以及方法。

本发明的一方面在于提供一种CTHRC1核酸序列或蛋白作为在样品中检测肝硬化或肝纤维化的试剂中的应用，其中CTHRC1的核酸序列如SEQ ID NO：1所示，CTHRC1蛋白如SEQ ID NO：2所示。

其中，前述试剂是用于识别CTHRC1蛋白抗原表位的抗体。

或者，前述试剂也可是用于识别CTHRC1核酸序列的核酸探针。