[发明专利]一种荧光定量PCR检测鉴定乳状耳形螺的方法有效
| 申请号： | 202010602435.9 | 申请日： | 2020-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN111705141B | 公开（公告）日： | 2023-04-28 |
| 发明（设计）人： | 王沛;胡美玲;周卫川;林阳武;杨姗萍 | 申请（专利权）人： | 福州海关技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 饶文君;蔡学俊 |
| 地址： | 350001 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 荧光 定量 pcr 检测 鉴定 乳状 耳形螺 方法 | ||
1.一种荧光定量PCR检测鉴定乳状耳形螺的方法，其特征在于：所述方法是应用特异性引物及荧光探针对乳状耳形螺的分子特征进行识别，所述引物及荧光探针为：
上游引物为OLF：5’- TTCCGTGGATTTGGCTATTT -3’，
下游引物为OLR：5’- TGGTAATAGCACCCGCCAAA -3’，
荧光探针为OLP：5’-FAM- CGGTCACCAGGAGTCACTCTAGAACG –BHQ1-3’，5’端标记的荧光报告基团是FAM，3’端标记的荧光淬灭基团是BHQ1，
以上引物及探针浓度均为10μmolL；
所述荧光定量PCR反应体系总体积为25μL，其中2×Premix Ex TaqTM PCR（ProbeqPCR）12.5μL，上、下游引物及探针各1μL，100ngμL DNA模板2μL，ROXII 0.5μL，ddH2O 7μL；所述荧光定量PCR反应的程序为：95℃预变性5min；95℃ 10s，60℃ 32s，40个循环；结束反应；
所述荧光定量PCR反应结束后根据扩增曲线判定结果，判定方法如下：在空白对照及阴性对照无 Ct 值且无扩增曲线条件下，当待测样品出现典型的扩增曲线，且Ct值小于或等于35时，判定为乳状耳形螺；当Ct值等于40时，判定为非乳状耳形螺；当Ct值大于35且小于40时，重新进行测试：当Ct值等于40时，判定为非乳状耳形螺；Ct值小于40时，则判定为乳状耳形螺。
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