[发明专利]一种赤苍藤幼胚离体再生的方法

说明书

本发明公开了一种赤苍藤幼胚离体再生的方法，属于植物组织培养领域。包括步骤：采集赤苍藤的未成熟果实作为外植体；对外植体消毒后进行培养获得愈伤组织；不定芽诱导培养；壮苗培养；生根培养；进行移植。本发明采用植物组织培养技术建立了赤苍藤幼胚离体再生的方法，本发明具有成本低廉、繁殖系数高、种苗生长相对一致等特点，可直接用于赤苍藤种苗的工厂化生产，对于促进赤苍藤的种质资源利用具有重大意义。同时由于本发明经过愈伤组织培养环节，对后续的遗传体系的建立，转基因等种质资源更新、遗传改良工作更具现实意义。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种赤苍藤幼胚离体再生的方法。

背景技术

赤苍藤(Erythropalum scandens BL.)又名蚂蟥藤、龙香藤、细绿藤等，为铁青树科赤苍藤属木质藤本植物，主要分布于我国广西、广东、云南、贵州等地，常见于低山丘陵或山区溪边、山谷、密林或疏林、林缘或灌丛中。赤苍藤具有清热利湿、祛风活血的功效，在广西民间常用于肝炎、肿瘤、尿道炎、急性肾炎等疾病的治疗。此外，赤苍藤属于野菜中叶菜类的一种，具有鲜嫩、清醇、芳香等独特滋味，富含胡萝卜素，维生素以及铁、锌、铜、锰等矿物质，广西民间有采摘赤苍藤当茶饮用的习惯。同时，赤苍藤花排成腋生的二歧聚伞花序，花冠白色，花萼筒顶端有宿存的波状裂齿，未成熟时淡红褐色，干后为黄褐色。叶纸质至厚纸质，卵形，叶上面绿色，背面粉绿色，结成下垂的果实，未成熟时蓝紫色，是极具观赏价值的观叶、观果景观树种。

由于野生赤苍藤生长境地的特殊性，难以采摘，无法满足市场需求，因此大面积栽培势在必行。鉴于目前国内对赤苍藤的人工繁育未取得突破性进展，有必要建立赤苍藤的组织培养快繁体系。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的问题，提供一种赤苍藤幼胚离体再生的方法，建立赤苍藤离体快速繁殖技术体系

为实现本发明目的，通过以下技术方案予以实现：

一种赤苍藤幼胚离体再生的方法，包括以下步骤：

(1)外植体采集：采集赤苍藤的未成熟果实作为外植体；

(2)愈伤组织培养：对外植体消毒后剥开外种皮，取出幼胚进行培养获得愈伤组织；

(3)不定芽诱导培养：对愈伤组织进行诱导培养，得不定芽；

(4)壮苗培养：对不定芽进行壮苗培养，得幼苗；

(5)生根培养：对幼苗进行生根培养，得试管苗；

(6)移植：将试管苗进行移植，得种苗。

优选地，所述步骤(2)中：先使用酒精消毒，冲洗，然后再使用升汞溶液消毒并冲洗。

优选地，所述步骤(2)中：将幼胚在愈伤组织培养基上培养45-55天；

所述愈伤组织培养基的条件为：

改良white培养基，1.0-2.0mg/L核黄素，0.5-1.0mg/L KT，0.1-0.5-4.5mg/L NAA，25-30g/L蔗糖，3.0-4.0g/L琼脂，pH为5.4-5.8。

优选地，所述步骤(3)中，将愈伤组织接种到不定芽诱导培养基中培养30-45天；

所述不定芽诱导培养基的条件为：

1/2MS培养基，1.0-3.0mg/L核黄素，0.5-1.0mg/L KT，1.0-1.5mg/L NAA，55-30g/L蔗糖，3.0-4.0g/L蔗糖，pH为5.4-5.8。

优选地，所述步骤(4)中，将不定芽切成1.5-2cm长的茎段并接种到壮苗培养基中培养25-35天；

所述壮苗培养基的条件为：