[发明专利]一叶萩来源的氧化酶及其应用

说明书

本发明公开了一种一叶萩来源的氧化酶SEQ ID NO:2，能够催化L‑抗坏血酸/去氢抗坏血酸与别一叶萩碱进行氧化缩合反应来制备一叶萩生物碱fluesuffine A及其类似物，具有研究开发价值。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地说，涉及一种一叶萩来源的氧化酶FsBBE及其在制备一叶萩生物碱fluesuffine A中的应用。

背景技术

一叶萩，学名为Flueggea suffruticosa(Pall.)Baill.，是大戟科叶底珠属植物，在我国分布较为广泛，全国除西北没有发现外，其他各省区均有分布。一叶萩在传统中药用于治疗麻痹症、神经衰弱、嗜睡等多种神经相关疾病。一叶萩中含有丰富的一叶萩生物碱，被认为是一叶萩植物的生物活性成分，包括一叶萩碱(securinine)、别一叶萩碱(allosecurinine)，一叶萩碱是被用来治疗小儿麻痹后遗症的药物，近些年从一叶萩中又分离到一些结构新颖的活性化合物，并且这些新化合物具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌和中枢神经等多种活性。对一叶萩中生物碱的研究能够从中发现更多的生物活性成分，对一叶萩生物碱合成途径的解析，能够从中找到一些新功能的酶，找到新的生物催化的工具，从而为合成生物学的方法合成一叶萩生物碱打下基础，因此能对这一中药植物资源更为充分的开发利用。

发明内容

我们对一叶萩中的一些生物碱成分进行了提取、分离和鉴定，分离得到一个结构新颖的一叶萩生物碱，具有下述式1所示的分子结构，将其命名为fluesuffine A：

该化合物1的分子结构中ABCD环部分与allosecurinine(别一叶萩碱)/securinine(一叶萩碱)的结构极为相似，参见下式。

推测ABCD环部分很可能来源于allosecurinine或者securinine，结构中FG环被高度氧化的6碳结构部分，很可能来源于维生素C或称L-抗坏血酸(L-ascorbic acid，L-AA)，因此化合物1很可能是一个维生素C化的天然产物。化合物1的生物合成途径被推断为下述路径。

酪氨酸(L-tyrosine)和赖氨酸(L-lysine)经过多步酶催化修饰后，聚合而成allosecurinine/securinine，然后allosecurinine/securinine和L-ascorbic acid(L-AA)在某种/些氧化酶(oxidase)经过一步或多步的催化作用下聚合生成化合物1。

为了验证上述推测，我们从一叶萩植株中分离出一种氧化酶及其编码基因，经序列分析比较，发现其应属于BBE家族的氧化还原酶，因此命名为FsBBE，其可以催化L-抗坏血酸或去氢抗坏血酸(dehydroascorbic acid，DHA)与别一叶萩碱发生氧化缩合反应，得到化合物1。

因此，本发明的第一个方面提供了一种分离的多肽，所述的多肽选自下组：

(a)具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽：