[发明专利]一种利用巯丙基琼脂糖球负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶检测葡萄糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用巯丙基琼脂糖球负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶检测葡萄糖的方法。该方法以巯丙基琼脂糖球为载体，通过化学反应在巯丙基琼脂糖球的表面和内部负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，形成检测微单元，然后将负载酶的巯丙基琼脂糖球固定在试纸上形成葡萄糖检测试纸条，对葡萄糖进行检测。本发明制备简单，反应条件温和，可以实现随时随地快速高效检测，并且价格低廉，使用安全，对临床葡萄糖监测和疾病诊断有重要指导意义。

技术领域

本发明涉及医学体外诊断技术领域，具体涉及一种利用巯丙基琼脂糖球负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶检测葡萄糖的方法。

背景技术

葡萄糖是自然界中最为重要且分布最广的一种单糖，化学式为C₆H₁₂O₆，是多羟基醛的一种，是人体内各组织细胞活动所需的物质。血糖是指血液中葡萄糖，尿糖是指尿液中葡萄糖，人体内的血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。正常人在空腹血糖浓度为3.9-6.0mmol/L，其受饮食、神经系统、激素等影响，当出现不平衡时，会出现血糖升高或降低，空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖，血糖浓度低于3.9mmol/L称为低血糖。

糖尿病是一种常见的内分泌疾病，是由于人体内胰岛素分泌绝对或相对不足以及机体靶细胞对胰岛素敏感性降低而引起的血中糖、脂肪、蛋白质等一系列代谢紊乱综合征，其主要特点是高血糖。随着我国人口老龄化趋势以及生活习惯、饮食结构的改变，糖尿病的发病率明显升高，长期的糖代谢紊乱会引起多器官、多系统的损害，如心、肾、眼、神经等。葡萄糖是临床生化检验中的重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。因此，坚持定期检测血糖和尿糖对糖尿病的治疗有极其重要的意义。

目前，血清中葡萄糖的检测方法主要有：葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法、电极法、干化学法、气相色谱一同位素稀释质谱法以及无创血糖测量法等。尿糖的检测方式主要包括班氏法检测、费氏法检测、葡萄糖氧化酶试纸法检测、尿液干化学分析仪检测等。己糖激酶方法多见于自动生化分析仪，但从红细胞中释放出的有机磷酸酯和一些酶会消耗NADP，使结果产生偏差，并且价格偏高，临床应用受到限制。葡萄糖脱氢酶法会受到己糖、木糖等其他糖类的干扰而导致测试者血糖值假性偏高。电极法方法简便迅速，标本用量较少，且特异性、灵敏度、精密度、准确性均较高，但需要专业设备，适合在医院等机构使用，不适合居家使用。干化学法快速简便，主要用于急诊。班氏法能够了解患者尿液中糖分类型，但是对病情较低的糖尿病患者无诊断意义，并且需要较长的反应时间，容易受其他因素的干扰，从而出现漏诊或误诊的现象。尿液干化学分析仪检测法是一种现代化的尿糖检测方式，该检查方式具有快捷、准确率高等特点，但是该检测方式会受到温度、尿液中过氧化氢的含量等多方面内的影响，并且该方法的成本较高，无法在基层医院里推广使用。葡萄糖氧化酶法的基本原理是：β-D-葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，被氧化生成过氧化氢，在过氧化氢酶的催化下能使发光底物发出光信号，此方法操作简便，性能较好，用量少，成本低，受糖类还原物质的影响小，广泛用于临床，是卫生部推荐的血糖测定的常规方法，但抗干扰能力稍差，反应条件高，无法回收继续利用，因此考虑采用酶固化的方法，将葡萄糖氧化酶固定在基底上进行检测，可以提高酶的稳定性并且降低使用成本。中国专利CN102199592A【一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法】介绍了一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法，以壳聚糖-精氨酸阴离子微球为载体固定葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶对β-D-葡萄糖进行检测，是对β-D-葡萄糖检测体系进行的有益尝试和补充，但其制备流程复杂，会受到共存的其他组份的干扰，从而影响测定结果，此外其吸光度变化小，灵敏度较低，需要进一步改进。

发明内容