[发明专利]新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板和在所述底板上顺次搭接粘贴的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；

所述胶体金垫上涂覆有胶体金标记核衣壳蛋白、胶体金标记棘突蛋白和胶体金标记兔IgG抗体复合物；

所述硝酸纤维素膜上设有IgG抗体检测线和IgM抗体检测线。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述胶体金垫的胶体金标记核衣壳蛋白、胶体金标记棘突蛋白和胶体金标记兔IgG抗体的摩尔比为(1～5):(1～5):1；

优选地，所述胶体金标记核衣壳蛋白、胶体金标记棘突蛋白和胶体金标记兔IgG抗体复合物在胶体金垫上的喷涂量为10～20μL/cm。

3.根据权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于，所述IgG抗体检测线上包被有抗人IgG抗体；

优选地，所述抗人IgG抗体的包被浓度为2～3mg/mL；

优选地，所述IgM抗体检测线上包被有抗人IgM抗体；

优选地，所述抗人IgM抗体的包被浓度为2～3mg/mL。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上还设置有质控线；

优选地，所述质控线上包被有与胶体金垫上的标记抗体发生抗原抗体反应的二抗；

优选地，所述质控线上包被有抗兔IgG抗体；

优选地，所述质控线上的抗兔IgG抗体的浓度为2～3mg/mL。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条外包装有塑料外壳；

优选地，所述塑料外壳上设置有加样孔和观察窗；

优选地，所述加样孔位于所述样品垫的上方；

优选地，所述观察窗位于所述检测线和质控线的上方。

6.一种新型冠状病毒IgG和IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-5任一项所述的试纸条；

优选地，所述试剂盒还包括样本稀释液；

优选地，所述样本稀释液为含有酪蛋白和ProClin的PBS溶液；

优选地，所述酪蛋白在所述PBS溶液中的浓度为0.2％～2％；

优选地，所述ProClin在所述PBS溶液中的浓度为0.02％～0.2％。

7.一种权利要求1-5任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)采用胶体金分别标记核衣壳蛋白、棘突蛋白和兔IgG抗体，将得到的胶体金标记核衣壳蛋白、胶体金标记棘突蛋白和胶体金标记兔IgG抗体混合后形成胶体金金标复合物，将胶体金金标复合物复溶和浓缩后，喷涂于胶体金垫上；

(2)在硝酸纤维素膜上分别包被IgG检测线、IgM检测线和质控线，烘干；

(3)将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸顺次搭接粘贴在底板上，得到所述试纸条。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述胶体金的粒径为20～30nm；

优选地，采用胶体金标记核衣壳蛋白，所述核衣壳蛋白在胶体金溶液中的浓度为15～20μg/mL，标记时间不短于3h；

优选地，采用胶体金标记核衣壳蛋白，封闭液为0.1％～2％BSA，封闭时间为16～20h；

优选地，采用胶体金标记棘突蛋白，所述棘突蛋白在胶体金溶液中的浓度为15～20μg/mL，标记时间不短于3h；

优选地，采用胶体金标记棘突蛋白，封闭液为0.1％～2％BSA，封闭时间为16～20h；

优选地，采用胶体金标记兔IgG抗体，所述兔IgG抗体在胶体金溶液中的浓度为8～10μg/mL；

优选地，所述复溶的溶液为含有蔗糖、海藻糖、BSA和Tween-20的Tris溶液；

优选地，所述检测线的包被液为PBS溶液；

优选地，所述质控线的包被液为PBS溶液；

优选地，所述烘干的温度为30～37℃；

优选地，所述烘干的时间为1～4h。