[发明专利]DNA条形码序列及其鉴定枸杞种属的方法在审
申请号: | 202010607996.8 | 申请日: | 2020-06-30 |
公开(公告)号: | CN111733273A | 公开(公告)日: | 2020-10-02 |
发明(设计)人: | 石志刚;万如;王秀英;张曦燕;李云翔;杨利斌;王孝;马婷慧 | 申请(专利权)人: | 宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6869 |
代理公司: | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人: | 张倩 |
地址: | 750002 宁夏回族*** | 国省代码: | 宁夏;64 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | dna 条形码 序列 及其 鉴定 枸杞 种属 方法 | ||
1.一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述DNA条形码为psbH-petB条形码。
2.如权利要求1所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:步骤如下:
1)从枸杞样品中提取基因组DNA;
2)以所述基因组DNA为模板,用如核苷酸序列SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示引物扩增psbH-petB条形码的序列片段,得到PCR产物;
3)对所述PCR扩增产物进行测序;
4)构建系统进化树,鉴定枸杞。
3.如权利要求2所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述步骤1)中,样品基因组DNA采用试剂盒进行抽提。
4.如权利要求3所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述步骤1)中,DNA的抽提步骤如下:
(1)DNA的提取
将所述枸杞样品经洗涤,-80℃冻存,并采用试剂盒(DNA secure Plant Kit)提取所述枸杞样品的总DNA;
(2)DNA浓度与纯度检测
将所述步骤(1)提取得到的总DNA分别进行琼脂糖凝胶电泳检测和紫外分光光度计检测。
5.如权利要求2所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述步骤2)中,PCR扩增的反应体系为:①94℃预变性2min;②94℃变性30s,55℃退火30s(退火温度可在58-60℃之间调节),72℃延伸2min,35次循环;③72℃保温10min;④4℃保存。
6.由权利要求1-5任一所述方法构建的枸杞样本psbH-petB条形码数据库,包含psbH-petB条形码24条,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-24所示。
7.权利要求6所述枸杞样本psbH-petB条形码数据库在鉴定枸杞品种的用途。
8.如权利要求6所述枸杞样本psbH-petB条形码数据库在鉴定枸杞品种的用途,其特征在于:步骤如下:通过将待鉴定样品的psbH-petB条形码序列与所述psbH-petB条形码数据库中的序列进行比对,以鉴定枸杞品种,并确定枸杞的种间关系。
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