[发明专利]DNA条形码序列及其鉴定枸杞种属的方法在审

专利信息
申请号: 202010607996.8 申请日: 2020-06-30
公开(公告)号: CN111733273A 公开(公告)日: 2020-10-02
发明(设计)人: 石志刚;万如;王秀英;张曦燕;李云翔;杨利斌;王孝;马婷慧 申请(专利权)人: 宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/6869
代理公司: 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 代理人: 张倩
地址: 750002 宁夏回族*** 国省代码: 宁夏;64
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摘要:
搜索关键词: dna 条形码 序列 及其 鉴定 枸杞 种属 方法
【权利要求书】:

1.一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述DNA条形码为psbH-petB条形码。

2.如权利要求1所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:步骤如下:

1)从枸杞样品中提取基因组DNA;

2)以所述基因组DNA为模板,用如核苷酸序列SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示引物扩增psbH-petB条形码的序列片段,得到PCR产物;

3)对所述PCR扩增产物进行测序;

4)构建系统进化树,鉴定枸杞。

3.如权利要求2所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述步骤1)中,样品基因组DNA采用试剂盒进行抽提。

4.如权利要求3所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述步骤1)中,DNA的抽提步骤如下:

(1)DNA的提取

将所述枸杞样品经洗涤,-80℃冻存,并采用试剂盒(DNA secure Plant Kit)提取所述枸杞样品的总DNA;

(2)DNA浓度与纯度检测

将所述步骤(1)提取得到的总DNA分别进行琼脂糖凝胶电泳检测和紫外分光光度计检测。

5.如权利要求2所述一种利用DNA条形码鉴定枸杞品种的方法,其特征在于:所述步骤2)中,PCR扩增的反应体系为:①94℃预变性2min;②94℃变性30s,55℃退火30s(退火温度可在58-60℃之间调节),72℃延伸2min,35次循环;③72℃保温10min;④4℃保存。

6.由权利要求1-5任一所述方法构建的枸杞样本psbH-petB条形码数据库,包含psbH-petB条形码24条,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-24所示。

7.权利要求6所述枸杞样本psbH-petB条形码数据库在鉴定枸杞品种的用途。

8.如权利要求6所述枸杞样本psbH-petB条形码数据库在鉴定枸杞品种的用途,其特征在于:步骤如下:通过将待鉴定样品的psbH-petB条形码序列与所述psbH-petB条形码数据库中的序列进行比对,以鉴定枸杞品种,并确定枸杞的种间关系。

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