[发明专利]一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法及其应用有效
申请号: | 202010608289.0 | 申请日: | 2020-06-29 |
公开(公告)号: | CN111830150B | 公开(公告)日: | 2022-07-08 |
发明(设计)人: | 刘宏炳;燕雪花;马昕;张建新;孟军;董文杰;安冬青 | 申请(专利权)人: | 新疆医科大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86 |
代理公司: | 西安亚信智佳知识产权代理事务所(普通合伙) 61241 | 代理人: | 段国刚 |
地址: | 830018 新疆维吾尔*** | 国省代码: | 新疆;65 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一测多评法 测定 新塔花 中黄 酮类 成分 含量 方法 及其 应用 | ||
1.一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法,其特征在于,采用芦丁作为内参物进行一测多评,建立芦丁与新塔花中黄酮类中木犀草苷、蒙花苷和芹菜苷之间的相对校正因子,通过校正因子计算新塔花中黄酮类成分中木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的含量,采用液相色谱法进行测定,具体方法如下:
(1)材料准备:将供试品新塔花磨成粉末,过2号筛备用;
(2)对照品溶液的制备:芦丁、木犀草苷、芹菜苷、蒙花苷对照品均精密称取,用甲醇溶解,制成浓度为1.0mg/mL的对照溶液;分别取上述标准对照品溶液10,30,70,500μL,用甲醇定容至1mL,混合摇匀,作为混合对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:
精密称取芳香新塔花总黄酮样品0.04g,置于10mL量瓶中,加甲醇约9mL超声处理使溶解,功率200W,频率40kHz,放冷后加甲醇定容至刻度,浓度4.0mg/mL,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液,备用;
(4)色谱条件及系统适用性试验:
流动相:水相:0.1%磷酸-水,有机相:甲醇;
梯度洗脱程序:0.01→40min,有机相:25%→30%,40.01→75min,39%,75.1min停止;
检测波长:359-361nm;流速:0.8-1.2mL/min;柱温:26℃;分离度大于1.5,理论塔板数按芦丁计算不低于5000;
液相色谱柱选用Hypersil ODS-2(C18),4.6mm×150mm,5μm,批号:12190 色谱柱;Hypersil ODS-2(C18),4.6mm×250mm,5μm,批号:12190色谱柱;Hypersil ODS-2(C18),4.6mm×150mm,5μm批号:10765色谱柱中的一种;
(5)测定:将供试品溶液放于离心机中13000r/min离心10分钟,精密吸取上清液10μL,注入液相色谱仪,采用内标法计算,供试品溶液的特征图谱中呈现木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的峰值,通过与芦丁的相对校正因子计算木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷的含量。
2.根据权利要求1所述的一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分的方法,其特征在于,所述检测波长为360nm。
3.根据权利要求1所述的一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分的方法,其特征在于,所述检测流速为1mL/min。
4.根据权利要求1所述的一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分的方法,其特征在于,所述液相色谱仪选用Agilent1220,岛津LC-20AT型,Waterse2695-2489型高效液相色谱系统中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分的方法,其特征在于,取步骤(2)混合对照品溶液,分别进样1、2、4、6、8、10μL测定,以芦丁为内标,分别计算木犀草苷、蒙花苷、芹菜苷的相对校正因子fR,采用Agilent1220,岛津LC-20AT型,Waterse2695-2489型3种高效液相色谱系统,Hypersil ODS-2(C18),4.6mm×150mm,5μm,批号:12190 色谱柱;Hypersil ODS-2(C18),4.6mm×250mm,5μm,批号:12190 色谱柱;Hypersil ODS-2(C18),4.6mm×150mm,5μm批号:10765 三种色谱柱,考察不同高效液相色谱系统和色谱柱对fR的影响,木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷四个成分的相对标准偏差RSD<2%,从中确定芦丁、蒙花苷、芹菜苷的相对校正因子fR为各实验所得数据的平均值,分别是0.932、1.337、4.011。
6.如权利要求1所述的一种一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法在检测新塔花中木犀草苷、芦丁、蒙花苷和芹菜苷中的应用。
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