[发明专利]一种动物深加工制品的高纯核酸提取方法及试剂体系

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种动物深加工制品的高纯核酸提取方法及试剂体系，其特征在于：所述的试剂体系包括体积份的裂解液480‑520份、蛋白酶K 0.008‑0.012份、除脂液0.4‑0.6份、去蛋白液0.4‑0.6份、磁珠缓冲液0.4‑0.6份、硅羟基磁珠0.02‑0.04份、洗涤缓冲液A 0.8‑1.2份，洗涤缓冲液B 0.8‑1.2份和洗脱缓冲液0.08‑0.12份组成的试剂体系；所述的提取方法包括样品前处理、裂解、去蛋白、去脂、核酸富集、洗脱等步骤。有效去除样品中脂类、盐类等杂质，大大提高了产物纯度和得量，具有安全、快捷、高效、所得产物符合下游试验要求的特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种动物深加工制品的高纯核酸提取方法及试剂 体系。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛 存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的 核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(简 称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。

核酸提取为大量广泛研究和应用提供了信息与材料，比如克隆、Qrt-PCR和全基因组、 转录组范畴中的二代测序技术，获得的核酸材料可以多种方式进行应用。核酸提取主要为使 细胞或组织样品裂解，首先保证核酸一级结构的完整性，其次要排除其它分子的污染，去除 非核酸污染物，如蛋白质、脂类、盐类等杂质。提取核酸时要简化步骤，缩短提取时间， 减少化学因素对核酸的降解，减少物理因素对核酸的降解，减少机械剪切力和高温的影响， 以及生物降解。

传统提取方法在提取过程中需要用到氯仿、苯酚等有毒试剂，会对人体健康和环境造成 危害。而且提取时间长，提取步骤繁琐，需要进行反复地离心操作，容易造成机械剪切，得 率不稳定。

目前使用生物磁珠提取核酸，相比于传统的异戊醇抽提法和离心柱试剂盒法，稳定快 速，完整性好。磁珠法通用的操作流程：裂解、结合、洗涤、洗脱。随着磁珠法核酸提取技 术的日益普及，基于磁珠法核酸提取开发的全自动核酸提取仪，因其高通量、自动化、减少 操作者与试剂及样本的接触、减少人工操作引起的误差，结果稳定，重复性好等特点使得全 自动核酸提取仪越来越被市场所接受。

动物深加工制品在加工过程中会加入大量油脂、调味品、防腐剂、添加剂等，干扰核酸提取 中产物的洗涤纯化。而且一般会经过高温、油炸、脱水等处理，使得核酸片段较小，含量较 低，不易提取。深加工制品消化较困难，杂质较多，对试剂体系及试剂盒的性能要求较高， 大多数操作过程需要高温孵育，造成实验室气溶胶污染严重。同时市场上其他在售生物磁珠 类试剂盒提取所得核酸产物浓度和纯度过低，不能很好符合下游试验如qPCR、测序等要 求，在实际检测过程中容易出现假阴性。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种动物深加工制品的高纯核酸提取方法及试剂 体系，填补了动物深加工制品的高纯核酸提取的空白，通过增加样品前处理，加入除脂液和 改良洗涤液的方式，有效去除样品中脂类、盐类等杂质，大大提高了产物纯度和浓度，通过 常温裂解和洗脱，有效避免实验室气溶胶交叉污染，具有安全、快捷、所得产物符合下游试 验要求的特点。

解决以上技术问题的本发明中的一种提取动物深加工制品的高纯核酸提取方法及试剂体 系，其特征在于：包括体积份的裂解液400-800份、蛋白酶K 0.008-0.012份、除脂液 0.4-0.6份、去蛋白液0.4-0.6份、磁珠缓冲液0.4-0.6份、硅羟基磁珠0.02-0.04份、洗涤缓冲液A 0.8-1.2份，洗涤缓冲液B 0.8-1.2份和洗脱缓冲液0.05-0.15份组成的试剂 体系。

优化方案中，所述试剂体系中裂解液500份、蛋白酶K 0.01份、除脂液0.5份、去蛋白液0.5份、磁珠缓冲液0.5份、硅羟基磁珠0.03份、洗涤缓冲液A1份，洗涤缓冲液B 1份和洗脱缓冲液0.1份。