[发明专利]靶向细胞表面抗原MFI2蛋白的核酸适配体及应用

说明书

本发明提供一种靶向细胞表面抗原MFI2蛋白的核酸适配体及应用，其序列如SEQ NO.1所示。本发明采用细胞筛选的方法从ssDNA文库中筛选出靶向细胞表面抗原MFI2蛋白的适配体，并对筛选出的文库中的序列通过高通量测序的手段进行分析，最终通过对所得序列的稳定性以及亲和性的分析，挑选出适配体MS2‑1。并且通过流式细胞术和免疫荧光的方法证明适配体MS2‑1能够特异性地靶向MFI2阳性的肿瘤细胞并通过内吞作用进入细胞。可在制备胰腺癌靶向治疗药或检测试剂中的应用。

技术领域

本发明属生物制药领域，具体涉及一种靶向细胞表面抗原MFI2蛋白的核酸适配体及应用。

背景技术

胰腺癌因其早期诊断困难、后期治疗效果差，易局部复发和远端转移，被认为是死亡率最高的恶性肿瘤之一。分子靶向治疗因对肿瘤细胞有高特异性及高效杀伤性而被认为是治疗胰腺癌的有效手段。在前期研究中，我们通过对胰腺癌患者组织样本膜蛋白的分析，证实了胰腺癌特异性膜蛋白—黑素转铁蛋白(Melanotransferrin，MFI2)是敏感性高、特异性强、结构稳定的胰腺癌治疗新靶点。

目前大多数抗肿瘤药物都对肿瘤细胞有很好的杀伤作用，但由于缺乏对肿瘤细胞的特异性识别能力，其药效大大减弱的同时对正常细胞也存在极大的毒副作用。而抗体偶联药物因其对肿瘤细胞具有高特异性及高效杀伤性而备受关注。但同时，抗体药物仍存在诸多不足之处，昂贵的价格，以及抗体大分子在体内造成的免疫原性而危及生命等等问题亟待解决。

核酸适配体(Aptamer)是一类具有高亲和力和特异性的单链DNA或RNA寡核苷酸序列，有着与抗体类似的精准靶向性，它能够通过自身折叠所形成的发夹、茎环等结构结合其靶标上的互补空间结构，实现特异性识别功能。同时，与单克隆抗体相比，核酸适配体制备简单，成本较低，并且其分子量小于抗体，不易发生免疫反应，同时单链DNA的化学稳定性好，变性与复性可逆，易于长期保存和室温运输，是理想的靶向分子。因此，将核酸适配体与抗肿瘤药物偶联将会是肿瘤的分子靶向治疗一重大突破。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向细胞表面抗原MFI2蛋白的核酸适配体，是一种用于靶向胰腺癌特异性抗原MFI2蛋白的单链DNA核酸适配体。

本发明提供的核酸适配体的序列如SEQ NO.1所示：CACACATGATGCAGATCATGCGTCGATACTGTGTGTGCCTATGCGTGCTACCGTGAA。

本发明的另一个目的是提供所述的核酸适配体在制备胰腺癌靶向治疗药或在制备胰腺癌的检测试剂中的应用。

本发明采用细胞筛选的方法从ssDNA文库中筛选出靶向胰腺癌特异性抗原MFI2蛋白的适配体，并对筛选出的文库中的序列通过高通量测序的手段进行分析，最终通过对所得序列的稳定性以及亲和性的分析，挑选出适配体MS2-1。并且通过流式细胞术和免疫荧光的方法证明适配体MS2-1能够特异性地靶向MFI2阳性细胞。

附图说明

图1是核酸适配体MS2-1对MFI2-/-Panc-1细胞的亲和性分析。

图2是核酸适配体MS2-1在MFI2-/-293T细胞及MFI2+/+Panc-1细胞中的特异性靶向及内吞分析。

图3是核酸适配体偶联药物MS2-1-Dox对MFI2+/+Panc-1细胞和MFI2-/-细胞NB4细胞的毒性分析。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。

实施例1：适配体MS2-1与MFI2+/+Panc-1细胞的亲和性。