[发明专利]一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CA125表达的免疫荧光试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CA125表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得晚期胃癌患者外周血中的循环肿瘤细胞（CTC），进一步运用免疫荧光技术检测CTC上CA125表达情况。本发明提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发胃癌患者CA125表达情况。本发明提供的方法，循环肿瘤细胞分离好，能够避免血细胞的干扰，能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。标志物CA125使用表现出良好的特异性及灵敏度，提升了其在胃癌中的应用。

技术领域

本发明提供了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CA125表达的免疫荧光的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

胃癌（Gastric cancer,GC）是一种高度致命的恶性肿瘤，发病率居世界第四位（每年新增病例95万例），在2012年肿瘤相关死亡患者中排第三位。尽管近年来胃癌诊断和治疗方法有所改善，但胃癌患者5年生存率还不到30％，大约有50％胃癌患者治愈性切除后遭受肿瘤复发或转移。肿瘤复发和转移是胃癌患者死亡的主要原因。

循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。

糖类抗原125(carbodrate antigen125，CAl25)是胚胎发育过程中体腔上皮表达的一种大分子糖蛋白。CAl25首先发现于卵巢癌患者血清中，是卵巢癌和子宫内膜癌 的首选标志物。虽然CAl25目前认为是上皮性卵巢癌最敏感的标志物，但在胃癌患者中也有较高的阳性检出率。CAl25还与肿瘤的侵袭行为有关，CAl25阳性的病人5年生存率明显减低。患者CA125检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。

免疫荧光分析技术即将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来用以研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发出的荧光可在荧光显微镜下检出，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或橘红色)，可以看见荧光所在的细胞或组织，利用定量技术测定含量，从而对抗原进行细胞定性和定位分析。

针对目前临床实践中，胃癌患者CA125检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。因此，检测循环肿瘤细胞(CTC)CA125表达情况对胃癌预后及免疫治疗疗效评估具有重要价值。

目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东凯歌智能机器有限公司就循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术、检测设备、试剂盒开发与生产进行合作，山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司等单位进行推广应用，本项目为山东省重大科技创新工程项目，以山东第一医科大学济南校区的山东省药物研究院为核心，落实注册人制度，依托循环肿瘤细胞检测鉴定核心诊断技术，进一步注册鉴定诊断试剂盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、细胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受体、孕激素受体、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作为CTCs表达的示踪剂，注册超灵敏、超快速、高覆盖、低成本、准确特异的鉴定诊断试剂盒，通过与在济南注册的山东凯歌智能机器有限公司、山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司合作进行研发与推广。

发明内容