[发明专利]一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因突变的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因突变的试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫组化技术检测CTC的CEA表达情况。本发明提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发胃癌患者CEA表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。本发明提供的方法，能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。

技术领域

本发明提供了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

胃癌（Gastric cancer,GC）是一种高度致命的恶性肿瘤，发病率居世界第四位（每年新增病例95万例），在2012年肿瘤相关死亡患者中排第三位。尽管近年来胃癌诊断和治疗方法有所改善，但胃癌患者5年生存率还不到30％，大约有50％胃癌患者治愈性切除后遭受肿瘤复发或转移。肿瘤复发和转移是胃癌患者死亡的主要原因。

循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。

CEA(carcinoembryonic antigen)是指癌胚抗原，是一种酸性糖蛋白，45％为蛋白质，含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖及唾液酸等成分，分子量为150000-300000道尔顿，其编码基因位19号染色体。既往研究表明，结肠癌、胃癌、胰腺癌等消化道肿瘤患者血清中CEA均呈现不同程度的升高，CEA被广泛用作各种消化系统肿瘤的诊断及检测指标。随后研究发现，在肝癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、泌尿系肿 瘤等其他恶性肿瘤中也有不同程度的阳性率，在恶性肿瘤的鉴别诊断、病情监测、疗效评价等方面仍有重要作用。而目前临床实践中，患者CEA检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。

目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东凯歌智能机器有限公司就循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术、检测设备、试剂盒开发与生产进行合作，山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司等单位进行推广应用，本项目为山东省重大科技创新工程项目，以山东第一医科大学济南校区的山东省药物研究院为核心，落实注册人制度，依托循环肿瘤细胞检测鉴定核心诊断技术，进一步注册鉴定诊断试剂盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、细胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受体、孕激素受体、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作为CTCs表达的示踪剂，注册超灵敏、超快速、高覆盖、低成本、准确特异的鉴定诊断试剂盒，通过与在济南注册的山东凯歌智能机器有限公司、山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司合作进行研发与推广。

发明内容

为了克服晚期或复发胃癌患者无法实时或反复穿刺获取组织标本、进而不能评估患者CEA状态的不足，本发明提供了一种胃癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因突变非诊断目的的检测方法：利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发胃癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫组化技术检测CTC的CEA表达情况。

本发明采用的技术方案如下：