[发明专利]支持CHO细胞高效生产单克隆抗体的培养基添加剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种支持CHO细胞高效生产单克隆抗体的培养基添加剂，其由以下组分组成：苦瓜多肽、核桃油、大豆卵磷脂、脂溶性维生素、微量元素、氨基酸和水。本发明还提供了所述培养基添加剂的制备方法和用途。本发明的培养基添加剂原料来源简单，无动物来源成分，成本低，能够支持CHO细胞高密度生长，单克隆抗体高效表达，延长培养平台期，提高单克隆抗体产量。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种支持CHO细胞高效生产单克隆抗体的培养基添加剂，以及该培养基添加剂的制备方法和应用。

背景技术

单克隆抗体药物特异性强、临床研究成功率高于小分子药物，临床需求量大，市场前景广阔，社会经济价值巨大，己经成为现代生物制药产业中发展最快的领域。由于抗体类药物用药量大、对生产工艺、设备、和产品质量要求高，需要很高生产技术平台，而抗体生产技术成为限制我国单克隆抗体产业发展的主要的瓶颈之一。已有单克隆抗体药物原研药被纳入国家医保，如西妥昔单抗，其价格已大幅降低，因此国内单抗仿制药更需要进一步控制成本。在CHO细胞悬浮培养生产单克隆抗体过程中，也存在诸多问题和瓶颈，最主要的是单抗产量的问题。如何提高CHO细胞生产单克隆抗体的产量，是亟待解决的问题。

CHO细胞作为表达抗体药物等外源蛋白的理想宿主，在生物制药产业中获得广泛应用。CHO细胞生长和抗体表达过程中需多达上百种的营养物质和成分，这些物质的物理化学性质如溶解性、稳定性等差异巨大，细胞的需求以及其对细胞生长和抗体表达的影响也各有差异。培养基成分中大部分为水溶性成分，但仍需部分脂溶性成分，两者不能互溶。即便是根据细胞代谢特征定制的培养基，也需要综合考虑溶解性、稳定性、保质期、制备工艺等问题，而不能完全包含所需成分。化学成分明确的培养基虽然具有多种优点，但也具有原料成本高，制备工艺复杂等限制，并且随着培养过程中细胞密度不断增大，也会逐渐表现出营养不均衡，导致细胞凋亡。

一些植物来源的多肽、油脂等，营养丰富，来源简单，成本低。苦瓜多肽是从苦瓜中提炼出来的多肽类生物活性成分，与胰岛素有相似的结构和理化指标，不仅具有胰岛素样作用，同时含有多种氨基酸、小分子化合物、维生素C、胰蛋白酶抑制剂等。核桃油含富含棕榈酸(C16:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)等脂类成分，同时还含有脂溶性维生素、叶酸、硒元素、黄酮多酚等抗氧化物质。纳米乳液是油、水、乳化剂混合经高压均质所形成的均一乳液，粒径一般在200nm以下，具有动力学稳定性，保持活性、增加稳定性、改善溶解性、提高分散性和生物利用度等特点。纳米乳液能提高油溶活性物的水溶性。

发明内容

本发明的目的在于针对以上要解决的技术问题，提供一种能够实现CHO细胞的高密度生长、长时间高效表达单抗、支持CHO细胞高效生产单克隆抗体的培养基添加剂。

本发明的另一个目的是提供该培养基添加剂的制备方法。

本发明的又一个目的是提供该培养基添加剂的应用。

为实现上述目的，本发明提供了一种支持CHO细胞高效生产单克隆抗体的培养基添加剂，该培养基添加剂由以下组分组成：苦瓜多肽、核桃油、大豆卵磷脂、脂溶性维生素、微量元素、氨基酸和水。

优选地，每1千克该培养基添加剂由以下组分组成：15-40g苦瓜多肽、10-30g核桃油、30-50g大豆卵磷脂、160-420μg脂溶性维生素、50.1-150.36mg微量元素、3.25-7.75g氨基酸和余量的水。

优选地，所述脂溶性维生素为维生素E、维生素K或二者的混合物。更优选地，维生素E的含量为每1千克培养基添加剂含有100-300μg维生素E。维生素K的含量为每1千克培养基添加剂含有60-120μg维生素K。更优选地，

优选地，所述微量元素包括柠檬酸铁、五水硫酸铜、一水合硫酸锰或其混合物。更优选地，所述微量元素为柠檬酸铁、五水硫酸铜、一水合硫酸锰的混合物，每1千克培养基添加剂含有的微量元素为50-150mg柠檬酸铁、60-200μg五水硫酸铜和40-160μg一水合硫酸锰。