[发明专利]胃癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞E‑Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得晚期胃癌患者外周血中的循环肿瘤细胞（CTC），进一步运用免疫荧光技术检测CTC上E‑Cadherin表达情况。本发明提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发胃癌患者E‑Cadherin表达情况。本发明提供的方法，循环肿瘤细胞分离好，能够避免血细胞的干扰，能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。标志物E‑Cadherin使用表现出良好的特异性及灵敏度，提升了其在胃癌中的应用。

技术领域

本发明提供了一种检测胃癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

胃癌（Gastric cancer,GC）是一种高度致命的恶性肿瘤，发病率居世界第四位（每年新增病例95万例），在2012年肿瘤相关死亡患者中排第三位。尽管近年来胃癌诊断和治疗方法有所改善，但胃癌患者5年生存率还不到30％，大约有50％胃癌患者治愈性切除后遭受肿瘤复发或转移。肿瘤复发和转移是胃癌患者死亡的主要原因。

循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。

E-钙粘蛋白(E—Cadherin)是上皮细胞表型最经典的标志物，E-Cadherin表达的下调标志着细胞之间粘附能力的下降，因此E-Cadherin被当做鉴定胃癌EMT发生的主要手段之一，作为一类细胞表面糖蛋白，E-Cadherein在细胞-细胞之间的粘附中发挥重要作用，并参与组织器官的维持。近年来有关于胃癌EMT和肿瘤耐药之间的关系日益受到重视，大量研究显示在不同的肿瘤当中由于EMT的发生而同时耐药性的升高，并且都伴随着E-Cadherin表达的改变。目前临床实践中，患者E-Cadherin检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。

免疫荧光分析技术即将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来用以研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发出的荧光可在荧光显微镜下检出，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或橘红色)，可以看见荧光所在的细胞或组织，利用定量技术测定含量，从而对抗原进行细胞定性和定位分析。

针对目前临床实践中，胃癌患者E-Cadherin检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。因此，检测循环肿瘤细胞(CTC)E-Cadherin表达情况对胃癌预后及免疫治疗疗效评估具有重要价值。