[发明专利]一种江西铅山红芽芋多倍体包埋诱导的方法

说明书

本发明公开一种江西铅山红芽芋多倍体包埋诱导的方法，取红芽芋单芽用含有秋水仙素、壳寡糖、石墨烯量子点的培养液浸泡；经过浸泡的单芽用含有秋水仙素、壳寡糖、碳纳米管的培养液浸泡；经过浸泡的单芽与含有海藻酸钠和蔗糖的无钙离子改良培养液混合，得混合液；滴入含有秋水仙素、壳寡糖、石墨烯量子点、碳纳米管、氯化钙和蔗糖的培养液中包埋；包埋珠接种在固体培养基中培养；将发生变异的红芽芋单芽分离出来，接种至固体培养基上，继代培养3‑4次，得到江西铅山红芽芋多倍体丛生芽；丛生芽长到2‑3cm时，将单芽切下来转接至生根培养基中培养得到江西铅山红芽多倍体试管苗。本发明红芽芋多倍体包埋诱导的频率高达86.4％。

技术领域

本发明涉及多倍体诱导技术领域，具体涉及一种江西铅山红芽芋多倍体包埋诱导的方法。

背景技术

江西铅山红芽芋皮色鲜艳，顶芽红色，肉质细嫩，易煮烂而不糊，营养丰富，含多种微量元素，是芋中之珍品，一直是国内外市场上紧俏的抢手货，是铅山县的拳头产品。目前，随着生产不断发展，植株无性繁殖积累病毒逐渐增多，江西铅山红芽芋品种普遍出现早衰现象，病害严重，产量和品质下降。因而，优良品种的选育已成为江西铅山红芽芋生产急需解决的问题。多倍体一般具有生长旺盛、产量高、适应性和抗逆性强等特点，且能够利用无性繁殖的方式固定其优良性状，使之保持稳定而不分离，所以多倍体育种一直被认为是创造蔬菜新品种的重要途径。专利CN103262792公开了一种江西铅山红芽芋多倍体诱导的方法，以江西铅山红芽芋为试材，通过秋水仙素诱变技术，获得红芽芋多倍体新种质，并从细胞学方面对其进行鉴定，对充分发挥和利用我国地方红芽芋资源优势，保护、开发我国道地蔬菜和丰富特色蔬菜种类有重要意义。然而，其诱导率仅仅为20.5％，并不能满足当今社会的需求。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种江西铅山红芽芋多倍体包埋诱导的方法使红芽芋多倍体包埋诱导的成活率提高至86.4％，且包埋诱导的多倍体红芽芋品质优良且抗逆性较强。

一种江西铅山红芽芋多倍体包埋诱导的方法，包括以下步骤：

(1)取江西铅山红芽芋单芽用含有秋水仙素、壳寡糖、石墨烯量子点的MS培养液a浸泡；以使秋水仙素诱导江西铅山红芽芋单芽形成多倍体。

(2)步骤(1)经过浸泡的江西铅山红芽芋单芽用含有秋水仙素、壳寡糖、碳纳米管的MS培养液b浸泡；

(3)将步骤(2)经过浸泡的江西铅山红芽芋单芽与含有海藻酸钠和蔗糖的无钙离子改良MS培养液c混合，得混合液；经过步骤(2)和步骤(3)的分阶段浸泡可以使芽更加有效的形成多倍体。

(4)将步骤(3)混合液滴入含有秋水仙素、壳寡糖、石墨烯量子点、碳纳米管、氯化钙和蔗糖的MS培养液d中进行包埋得红芽芋单芽包埋珠；将经过三步浸泡形成的多倍体进行浸泡后包埋，包埋的作用是使石墨烯量子点和碳纳米管吸附营养，稳定形成多倍体的效果并为多倍体提供充足的营养，增强秋水仙素的多倍体的诱导效果；充分发挥壳寡糖对多倍体的促进作用。

(5)将步骤(4)制备的红芽芋单芽包埋珠接种在MS固体培养基中培养；

(6)将形态上发生明显变异的红芽芋单芽从包埋珠中分离出来，并接种至MS固体培养基上，继代培养3-4次后，即可得到江西铅山红芽芋多倍体丛生芽；形态上变异即茎叶变得粗壮，并通过染色体数目鉴定，获得多倍体；将包埋珠剥离将芽分离出来再进行接种的有助于接种到新培养基的多倍体进行增殖并进一步形成丛生芽。

继代培养过程：将红芽芋多倍体芽接种到MS固体培养基上，放置于培养条件光照时间14h/d，光强1500-2000lx，培养温度25±2℃的条件下，培养60天后，再次将红芽芋多倍体芽分离，接种到MS固体培养基上，放置于培养条件光照时间14h/d，光强1500-2000lx，培养温度25±2℃的条件下，如此继代培养3-4次。

(7)当步骤(6)多倍体丛生芽长到2-3cm时，将单芽切下来转接至生根培养基中培养，得到江西铅山红芽芋多倍体试管苗。