[发明专利]一种融合蛋白及其在构建筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的系统中的应用

说明书

本发明公开了一种融合蛋白及其在构建筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的系统中的应用。本发明首先提供了一种融合蛋白，将N端的泛素化蛋白和C端的具有报告功能的蛋白通过3CL蛋白酶酶切位点氨基酸片段融合而成；所述3CL蛋白酶酶切位点氨基酸片段为3CL蛋白酶能够识别并进行酶切的氨基酸片段。利用该融合蛋白、其编码基因、包含其的载体或表达其的重组细胞构建得到了一种筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的系统，该系统方便快捷、操作简单，具有良好的特异性和敏感性；利用该系统能够便捷有效的筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂，筛选机理明确，速度快，作用效果直观，且通用性强，重复性好，假阳性率低，在筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于医学病毒学技术领域。更具体地，涉及一种融合蛋白及其在构建筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的系统中的应用。

背景技术

冠状病毒是感染人类呼吸系统的主要病原体之一，导致了严重急性呼吸综合征(SARS)、中东呼吸综合征(MERS)，以及2019冠状病毒疾病(COVID-19)。目前，对冠状病毒诱发疾病的机理及发病的分子细胞生物学的机制还缺乏了解，尚没有针对该类疾病的特异性抗病毒药物。

针对冠状病毒药物筛选模型的建立是冠状病毒病致病机理及其药物研究的重要基础，已有的针对冠状病毒的药物筛选模型，主要是基于病毒编码蛋白的体外酶活检测系统，不能充分体现病毒蛋白在细胞内工作的复杂性，因而限制了对病毒复制等机制的深入研究，进而影响冠状病毒致病机理相关知识的拓展，这些知识的缺乏又进一步限制了充分再现病毒蛋白功能的药物筛选模型的开发。近年来，随着冠状病毒一次又一次的爆发，与冠状病毒相关的流行病学、进化学和分子生物学的发展日趋深入，使得冠状病毒筛药模型的建立有了更为准确的理论基础，筛选角度也开始有了多样化发展。

3CL蛋白酶主要针对冠状病毒多聚蛋白进行酶切加工，是调节病毒复制转录的关键蛋白，是抑制病毒复制、实现临床抗病毒治疗效果的重要药物靶点，抑制其酶活性成为了抑制病毒复制和感染的重要策略。目前，已有的靶向3CL蛋白酶的药物筛选手段多基于电脑分析和细胞外系统的细胞外环境(Yu-ChihLiu etal，Screening of drugs by FRETanalysis identifies inhibitors of SARS-CoV 3CLprotease，2005；Pamela Hamilletal，Development of a Red-Shifted Fluorescence-Based Assay for SARS-coronavirus 3CL Protease:Identification of a Novel Class of anti-SARS AgentsFrom the Tropical Marine Sponge Axinella Corrugata，2006；Junwei Zhou etal，Identification of Novel Proteolytically Inactive Mutations in Coronavirus 3C-like Protease Using a Combined Approach，2019)，不能真实地再现细胞内3CL蛋白酶工作的状态，因而也限制了筛选高效抑制药物的进程以及对所筛选药物活性的进一步验证，难以获得高效的靶向抑制药物。

因此，提供一种操作简单、方便快捷的基于细胞内环境筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂方法，对于筛选治疗冠状病毒相关疾病的药物具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一种融合蛋白及其在构建筛选冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的系统中的应用。

本发明的目的是提供一种融合蛋白。

本发明另一目的是提供编码所述融合蛋白的基因。

本发明又一目的是提供一种单基因双表达病毒载体。

本发明又一目的是提供一种重组细胞。