[发明专利]一种靶向调控Serpin3基因的miR-199-x及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向调控Serpin3基因的miR‑199‑x及其应用，所述miR‑199‑x序列如SEQ ID NO:1所示，Serpin3基因序列如SEQ ID NO:2所示。所述miR‑199‑x靶向丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin3基因，miR‑199‑x负调控Serpin3的表达，Serpin3进一步负调控PO活力。说明miR‑199‑x靶向Serpin3对小菜蛾天然免疫进一步进行精准调控，可利用miR‑199‑x作为分子靶标来调控Serpin3的表达来进行生物防治小菜蛾等十字花科蔬菜害虫。

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，更具体地，涉及一种靶向调控Serpin3基因的miR-199-x及其应用。

背景技术

MicroRNA，简称miRNA，是一类长度为18～24nt的基因组编码的非编码RNA，在真核生物转录后基因表达的过程中发挥着至关重要的作用。要获得成熟的miRNA，需要经历primary miRNA(pri-miRNA)、pre-miRNA。RNA聚合酶最先合成的是miRNA的初始转录本，也就是pri-miRNA。Pri-miRNA一般长达数千nt，内部有茎环结构。在细胞核内，Pri-miRNA的茎环结构被RNase III型的核酸内切酶Drosha从初始转录本上切割下来，得到的大约65nt长的小发卡结构，称为pre-miRNA。随后，pre-miRNA被细胞核中的转运蛋白exportin 5(EXP5)转运到细胞质中。在细胞质中，pre-miRNA会被核酸内切酶Dicer切割，形成一个22nt左右的双链RNA。Drosha和Dicer切割miRNA前体时，需要许多辅助蛋白的帮助，例如DGCR8(针对Drosha而言)、TRBP和PACT(针对Dicer而言)，这个机制确保了整个过程可以受到精准的调控。随后，这个双链RNA会被装载到Ago蛋白中，以便形成最终发挥作用的RISC复合物(RNA-induced silencing complex，RNA介导的沉默复合体)。

miRNA主要有三种作用方式，转录抑制、mRNA的切割或降解。动物中一般不涉及mRNA的切割。miRNA通过碱基互补配对与靶标mRNA的3’端非翻译区结合而降解靶基因mRNA或者抑制其翻译成蛋白。miRNA不光可以与3’UTR结合，研究表明，它也可以与5’UTR或者CDS区结合行使功能。一般来说，结合到CDS区的miRNA主要是负调控，而结合到5’UTR的miRNA则常常起到转录激活的作用。

由于miRNA在转录后水平调控基因的表达，所以它在维持免疫稳态和免疫可塑性方面发挥着关键的作用。miRNA可以调控抗菌肽的表达。Choi和Hyun的研究表明miR-8在黑腹果蝇中负调控抗菌肽Drosomycin和Diptericin的表达，以便在正常非感染条件下维持其正常水平，从而实现免疫平衡。在敲除miR-8的幼虫和果蝇中，抗微生物肽的转录水平显着增加。据预测，miR-8可能靶向革兰氏阴性结合蛋白3(GNBP3)的转录本，该转录本在真菌感染后诱导Toll途径，并靶向JNK途径的调节剂Pvf。但是，目前还未见有可调控小菜蛾PO活力的miRNAs的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种靶向调控Serpin3基因的miR-199-x。

本发明的第二个目的在于提供一种提高miR-199-x表达的miRNA模拟物。

本发明的第三个目的在于抑制所述miR-199-x表达的miRNA抑制剂。

本发明的第四个目的在于提供所述miR-199-x和miR-199-x抑制剂的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种靶向调控Serpin3基因的miR-199-x，所述miR-199-x序列如SEQ ID NO:1所示，Serpin3基因序列如SEQ ID NO:2所示。