[发明专利]草莓脱毒健康种苗三级离体隔离扩繁技术

说明书

本发明公开了草莓脱毒健康种苗三级离体隔离扩繁技术，具体按照以下步骤实施：在组培室进行组培原原种，随后将原原种在无菌环境下隔离驯化，待驯化完成后，定植到原原种繁殖室，当原原种抽生匍匐茎形成根原基后及时剪下，集中密封于无菌袋中，然后到原种繁殖室中取出，定植于穴盘，经生长后形成分株，在形成气生根后剪下，并密封于无菌袋中，转移至生产种生产网室，然后经过压苗生产草莓脱毒种苗，因此本发明与传统脱毒育苗方式相比，脱毒种苗出组培室后可显著降低植株感染病毒病菌比例。

技术领域

本发明涉及一种草莓脱毒苗三级离体隔离扩繁技术，属于果树育苗方法。

背景技术

近年草莓生产发展迅速，近几年来栽培面积迅速扩大。草莓的种苗生产传统上采用匍匐茎繁殖和分株繁殖，而长期使用无性繁殖方法会使草莓品种退化，病毒感染严重。利用草莓茎尖培养快繁技术可部分或全部脱除病毒, 保持草莓品种的优良性状, 提高产量；繁殖快，对新品种的推广有利，快速繁殖不受季节影响，一年四季均可进行。目前脱毒苗研究主要集中于脱毒环节，重点在培养基的筛选、激素比例控制、环境调节以及驯化条件等方面进行优化，逐步形成了相对成熟的技术体系，由于组培过程中环境条件控制较严格，可完全阻断病毒和病菌的传播，但脱毒组培苗进入三级扩繁体系后，仍采取逐级压苗繁殖方式，并且三级苗繁殖基本处于相同环境中，尚未采取隔离措施，导致脱毒组培苗经过后期三级扩繁后，由于蚜虫、红蜘蛛、大青叶蝉等害虫以及栽培介质对草莓病毒和病菌的传播，达到生产种苗时，原本无病毒、无病菌健康种苗转变成了带毒带菌非健康种苗，因此，草莓脱毒健康种苗的生产必须对三级扩繁体系进行规范，阻断脱毒苗离开组培环境后的病菌病毒传播途径，保证进入生产的是脱毒健康种苗。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了草莓脱毒健康种苗三级离体隔离扩繁技术，按如下步骤进行：

步骤1）草莓脱毒苗驯化完成后，采用去离子水，流水洗净根部培养基，由原原种繁殖人员及时定植于灭菌基质中，所处环境为原原种隔离网室，温度控制在15-20℃，基质湿度控制于55-65%，空气湿度控制于85-95%，维持4-6天，缓苗完成后，在水肥一体化中加入硝态氮水溶性多元素平衡肥，总浓度控制在0.01-0.03ppm范围内，水分供应标准为基质湿度在55-65%之间，肥料每隔7天供应一次，直至幼苗抽生3片新叶；随后空气湿度需维持在65-70%，肥料供应时，在原基础上加入微量元素肥料，浓度维持在0.01-0.05%之间，氮磷钾浓度调整为0.1-0.2%；随后维持养分供应，原原种（一级苗）抽生匍匐茎，待匍匐茎第二节气生根生长至1-2mm时，使用采集工具，将第一和第二节一次性采下，并装于无菌袋中；

步骤2）将原原种繁殖室中装匍匐茎节的无菌袋带到原种隔离网室，并交于原种繁殖室操作专人，并对其使用工具及无菌袋外表面的灭菌；随后进入原种繁殖室，利用原种繁殖室工具将匍匐茎第一和第二节分离，定植于灭菌基质穴盘中，所用水仍为去离子水，基质湿度维持在75-85%，空气湿度维持在85-95%，待成活后，基质湿度将至60-70%，空气湿度将至60-65%，肥料采取硝态氮水溶性多元素平衡肥，浓度控制在0.1-0.2%，每隔7天施肥1次，直至抽生匍匐茎；待匍匐茎第二节气生根生长至1-2mm时，使用采集工具，将第一和第二节一次性采下，并装于无菌袋中；

步骤3）将原种繁殖室中装匍匐茎节的无菌袋带到生产种隔离网室，并交于生产种繁殖室操作专人，并对其使用工具及无菌袋外表面的灭菌；随后进入生产种繁殖室，利用生产种繁殖室工具将匍匐茎第一和第二节分离，定植于灭菌基质穴盘中，所用水为紫外线灭菌水，具体方法为将清水置于水肥一体化容器中，用浸泡型紫外线灭菌灯，紫外灯功率选择100-150瓦，灭菌30-40分钟，基质湿度维持在75-85%，空气湿度维持在85-95%，待成活后，基质湿度将至60-70%，空气湿度将至60-65%；肥料采取硝态氮水溶性多元素平衡肥，浓度控制在0.1-0.2%，每隔7天施肥1次，直至抽生匍匐茎，待发生茎节后，直接将茎节压于穴盘穴内，保持穴盘内基质湿度70-80，待茎节根系发育完善后剪断匍匐茎，周而复始，逐渐繁殖生产苗。