[发明专利]一种同时测定DON毒素及NIV毒素的方法

权利要求书

1.一种同时测定谷物中DON毒素和NIV毒素的方法，包括：

所述DON毒素代表脱氧雪腐镰刀菌烯醇；

所述NIV毒素代表雪腐镰刀菌烯醇；

1)将待测谷物样品置于溶剂中超声萃取，过滤收集滤液；

2)将步骤1)所得滤液上样于多功能净化柱，收集流出液吹干，再加入流动相溶解，过滤收集滤液；

3)标准曲线的绘制：

采用高效液相色谱法检测标准品溶液，收集流出液，以各标准峰面积为纵坐标，，以所述标准品溶液的浓度为横坐标，单位为ug/ml，进行拟合，得到DON毒素和NIV毒素的标准曲线；

所述标准品溶液为DON毒素的标准溶液和NIV毒素的标准溶液；

4)待测谷物样品中DON毒素和NIV毒素含量的测定：

按照与步骤3)相同的色谱检测条件，采用高效液相色谱法检测所述步骤2)所得滤液，收集流出液，将所得流出液纵坐标与步骤3)所得标准曲线对比，即可得到所述待测谷物样品中DON毒素和NIV毒素的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述溶剂选自乙腈、水中至少一种；具体选自由乙腈和水组成的混合液；所述混合液中，乙腈和水的体积比为80-90：16；具体为84:16；

所述待测谷物样品与溶剂的用量比为20-30g：100mL；具体为25g：100mL；

所述超声萃取步骤中，温度为30-38℃；具体为35℃；时间为20-40min；具体为30min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述多功能净化柱为Mycosep#227或Mycosep#226；

所述滤液的用量为0.8-1倍柱体积；具体为10ml；

所述吹干步骤中，温度为50-58℃；具体为55℃；所用设备为氮吹仪；

所述流动相为由水、乙腈和甲醇组成的混合液；所述水、乙腈和甲醇的体积比为90:5:5；

所述过滤步骤中，滤膜孔径为0.22um。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，高效液相色谱仪检测的条件如下：

色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5um；

等度洗脱流动相：由体积比为90:5:5的水、乙腈和甲醇组成的混合液；

流速：1.0ml/min；

检测波长：λ＝218nm；

柱温：40℃；

进样量：20ul。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，保留时间为14.7099min的为所述DON毒素；

保留时间为7.407min的为所述NIV毒素。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所得DON毒素标准曲线为Y＝25.5029X-3.7918

所得NIV毒素的标准曲线为Y＝41.3470X+3.0784；

其中，Y均为标准峰面积；X为溶液的浓度，单位为ug/ml。