[发明专利]碱性蛋白酶基因、碱性蛋白酶及其制备方法和应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶基因、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明碱性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于芽孢杆菌Bacillus patagoniensis碱性蛋白酶的序列(GenBank:WP_078392427.1)进行综合优化得到。本发明碱性蛋白酶AprBp的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了碱性蛋白酶的种类和来源途径，且其自身具有较高的酶活性，在5L发酵罐中的最高酶活可达18035U/mL，同时，在较宽的温度范围和碱性条件下均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及碱性蛋白酶基因aprbp及相应的重组表达载体、重组表达菌株，以及碱性蛋白酶AprBp及其制备方法和应用。

背景技术

蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶，蛋白酶作为一种重要的工业酶制剂，被广泛应用于饲料加工、酿造、洗涤、食品加工等领域。蛋白酶分布广泛，目前市面上的蛋白酶主要来源于微生物，相对于动物及植物，微生物蛋白酶pH值范围广，生产成本低。根据微生物蛋白酶最适反应pH环境可将蛋白酶分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。碱性蛋白酶是一类在碱性条件下水解蛋白质的酶类。

芽孢杆菌Bacillus patagoniensis碱性蛋白酶对许多蛋白原料(鱼粉、鸡肉粉、大豆蛋白粉等)具有良好的水解能力，表明该碱性蛋白酶在蛋白水解领域具有很好的应用潜力。然而，目前限制其在蛋白水解领域应用的主要因素是其生产成本过高，在摇瓶条件下天然菌Bacillus patagoniensis碱性蛋白酶发酵活力只能达到80U/mL。因此如果能够降低碱性蛋白酶的生产成本，可为其应用到不同的领域奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供碱性蛋白酶基因aprbp及相应的重组表达载体、重组表达菌株，以及碱性蛋白酶AprBp及其制备方法和应用，旨在解决现有来源于芽孢杆菌Bacilluspatagoniensis碱性蛋白酶的生产成本过高的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供了一种碱性蛋白酶基因aprbp，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明另一方面提供了一种碱性蛋白酶AprBp，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明再一方面提供了一种重组表达载体，其包括所述的碱性蛋白酶基因aprbp。

本发明又一方面提供了一种重组表达菌株，其包括上述的重组表达载体。

本发明还有一方面提供了一种碱性蛋白酶AprBp的制备方法，其包括如下步骤：

提供碱性蛋白酶基因aprbp、表达载体和表达菌株；

对所述碱性蛋白酶基因aprbp进行扩增，所得扩增产物与所述表达载体进行连接，得到重组表达载体；

将所述重组表达载体转入表达菌株，得到重组表达菌株；

对所述重组表达菌株进行培养，得到所述碱性蛋白酶AprBp；

其中，所述碱性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明最后一方面提供了上述碱性蛋白酶AprBp或上述碱性蛋白酶AprBp的制备方法制备得到的碱性蛋白酶AprBp在水解蛋白质中的应用。