[发明专利]一种检测SARS-CoV-2核酸的引物组合物、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种检测SARS‑CoV‑2核酸的引物组合物、试剂盒和方法。该引物组合物包括SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：6所示序列的引物，或者包括SEQ ID NO：7‑SEQ ID NO：11所示序列的引物。将含有上述引物组合物的引物液预先装进微流控芯片，组装成试剂盒。利用试剂盒的成分，在该微流控芯片中形成小体积旋转微流控荧光系统对SARS‑CoV‑2核酸进行检测。该引物组合物特异性强、灵敏度高，该试剂盒和方法具有快速高效、操作简便、抗干扰性强、重复性高、鉴定简便的优点，适合于口岸和现场检测。

技术领域

本发明涉及核酸检测领域，尤其涉及一种检测SARS-CoV-2核酸的引物组合 物、试剂盒和方法。

背景技术

2020年3月18日，美国梅里埃的COVID-19检测试剂盒获批美 国FDA应急使用EUA授权，用于新型冠状病毒的快速检测，该测试在其 2.0设备平台上运行，检测时间为45min，3月21日，美国赛沛宣 布其Xpert SARS-CoV-2核酸检测试剂获得EUA授权，用于进行SARS-CoV-2病 毒核酸的定性检测，检测时间为30min。3月28日，美国雅培宣布，FDA授予其 用于检测新型冠状病毒病(COVID-19)的分子即时检测(point-of-caretest，POCT) 产品雅培ID NOW紧急使用授权(EUA)。这一检测在短短五分钟内就可给出阳性结果，在13分钟内给出阴性结果，是目前报道速度最快的即时检测。

微流控芯片技术是20世纪90年代初由瑞士的Manz和Widmer提出的以微 机电加工技术为基础的“微型全分析系统”(miniaturized total analysis system， μTAS)上逐步发展起来的一项崭新学科和技术。哈佛大学Whitesides,GM教授 对该学科的定义是：微流控芯片是一门在微米尺度结构中操控纳升至皮升体积流 体的技术与科学。该技术的优势之一是增大了小体积反应腔的比表面积和腔体内 生化反应的传质传热效应，可有效实现快速反应动力学效应。目前尚未有采用微 流控芯片技术用于SARS-CoV-2核酸检测的报告。

综上所述，目前分子生物学技术的发展为病原体的早期诊断创造了条件，目 前应用于临床诊断的主要是PCR技术，包括以PCR为基础衍生出的多种技术： 包括反转录PCR(RT-PCR)、多重PCR、巢式PCR、RAPD技术、实时荧光定 量PCR等。然而，上述检测方法存在检测周期长、检测体系和操作过程比较复 杂，难以实行现场检测等问题，且需要专业人员操作。另外，PCR仪价格昂贵， 扩增时间较长。因此，在科学研究和生产实践中均需要一种快速简便、容易普及、 安全可靠且适用于现场操作的检测方法，尤其检测速度快对于疫情防控至关重要。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种检测SARS-CoV-2核酸的引物组合 物、试剂盒和方法，利用微流控小体积效应，实现反应腔体中有效的恒温扩增反 应，并应用于SARS-CoV-2核酸的快速有效分析。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面是提供一种检测SARS-CoV-2核酸的引物组合物，包括 SEQ IDNO：1-SEQ ID NO：6所示序列的引物，或者包括SEQ ID NO：7-SEQ ID NO：11所示序列的引物。

本发明的第二方面是提供一种检测SARS-CoV-2核酸的试剂盒，包括反应液、 微流控芯片、阳性对照、阴性对照、内标物和芯片封口膜；

其中，该微流控芯片里含有引物液，该引物液包括如第一方面的引物组合物。

进一步地，上述反应液还包括反转录酶、Bst DNA酶、dNTPs、10×等温扩 增反应缓冲液、荧光染料和镁离子溶液。