[发明专利]一种蚯蚓多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种蚯蚓多肽及其制备方法和应用。所述蚯蚓多肽的制备方法包括：发酵步骤：在含有蚯蚓颗粒的浆液中接种混合菌种进行发酵培养，得到发酵液；分离步骤：对所述发酵液进行分离处理，获取含所述蚯蚓多肽的分离产物；其中，所述混合菌种包括乳酸杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌、假交替单胞菌、产阮假丝酵母菌、酿酒酵母菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的两种或两种以上的组合。本发明的蚯蚓多肽的分子量更合适，安全性高，且稳定性优异，透皮吸收率高。进一步地，本发明的蚯蚓多肽对皮肤中的细胞的生长或增殖具有良好的促进作用，能够提高皮肤中的细胞再生能力，增加皮肤弹性。

技术领域

本发明属于生物技术领域或化妆品领域，具体涉及一种蚯蚓多肽的制备方法，以及所述制备方法制备得到的蚯蚓多肽及其应用。

背景技术

皮肤被覆于体表，作为人体对抗外界伤害的第一道防线，保护体内各种器官和组织免受外界有害因素损伤的同时，也易因各种外界环境影响或自身内源性因素的共同作用而产生皮肤松弛、无光泽、皱纹加深、色素沉着等衰老迹象。

胶原是真皮的主要成分，也是人体中含量最丰富的蛋白质，人类皮肤中各类型的胶原比例也随着年龄而变化，在年轻皮肤中，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原分别占皮肤总胶原的80％和15％，随着年龄的增长，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原会明显丢失，致使皮肤失去弹性，变得松弛，而胶原蛋白还具有涵养水分的作用，成为结缔组织中的保湿功臣，皮肤必须水分充足才不会干瘪松弛、出现皱纹。

造成这种变化的原因是：胶原是由皮肤中的成纤维细胞生成，而随着年龄及外界因素的变化，皮肤中的成纤维细胞的活性和数量都在慢慢衰减。因此如何增加皮肤中成纤维细胞的数量和增强其活性成了延缓皮肤衰老的一个重要且直接的途径。

蚯蚓，又名地龙，是一种蛋白质含量达45.9％-68.11％的软体环节动物。本身作为一种中药药材，具有溶栓、抗凝、抗癌、平喘、增强免疫力、促进伤口愈合等作用。蚯蚓的再生能力超强，身体受到外力的袭击被切断后会迅速生长出新的组织，最后恢复出完整的身体结构，如果将一条蚯蚓中间截断，能分裂复制出两条完整的蚯蚓。这种超强的再生能力提示我们，蚯蚓体内可能含有某些高生物活性的促细胞增殖物质。

目前对于蚯蚓分解成小分子片段的方法主要是水解或酶解。水解是利用酸或碱切断大分子结构中的某些分子链，水解反应强度较高，会形成分子量极小的片段；酶解是利用特定的酶作为催化剂来催化分解大分子结构，反应作用单一，特定的酶对特定的物质分解效果好，特定的酶只能作用于某些特定的肽键，所以形成的产物单一。

酶解法是现有的蚯蚓小分子肽的制备方法，大多数是以蚯蚓本身的自溶酶来制取去，也有引入外来蛋白酶的制备方法，如专利CN110025559A采用丙二醇作为溶剂，生姜作为促溶剂，利用黑曲霉产生的酸性蛋白酶作为外源蛋白酶，制备蚯蚓小分子肽提取物。这种方法虽然可以提升的提取率，但提取物混入了其他的杂质。专利CN103845272A通过将干净蚯蚓捣碎或将蚯蚓干品捣碎并浸泡于水中制得蚯蚓样品液，再利用自身酶或外加蛋白酶水解，以3万道尔顿的超滤膜超滤并冷冻干燥，得到蚯蚓提取物。这种方法所得产物虽然纯净，但产物较单一，影响其作用效果。

发明内容

一方面，本申请提供了蚯蚓多肽用于制备促进皮肤细胞生长或增殖的化妆品或药品中的用途，其中所述蚯蚓多肽的分子量为10000D以下。

在一些实施方案中，所述蚯蚓多肽的分子量为3000D～8000D。

在一些实施方案中，所述皮肤细胞选自人表皮成纤维细胞，人真皮成纤维细胞，人表皮角化细胞，人表皮角质形成细胞中的一种或多种。

一方面，本申请提供了所述蚯蚓多肽的制备方法，所述制备方法包括：

发酵步骤：在含有蚯蚓颗粒的浆液中接种混合菌种进行发酵培养；

分离步骤：对发酵步骤中制得的发酵液进行分离处理。