[发明专利]一种凝集素探针组合在基于尿蛋白糖型鉴定大鼠妊娠方面的应用

说明书

本发明提出一种凝集素探针组合在基于尿蛋白糖型鉴定大鼠妊娠方面的应用。该特定凝集素探针组合是Jacalin、PWM和HHL。当样本检测结果为Jacalin表达上调，且PWM和HHL表达下调，则表明相应主体在取样时处于妊娠期。利用本发明对大鼠妊娠状况进行鉴别，快速、简便、准确，实现成本较低。

技术领域

本发明涉及一种鉴别大鼠是否处于妊娠期的方法。

背景技术

对于家畜而言，动物妊娠诊断是生产经营中生殖管理的重要组成部分，比如奶牛，高繁殖率是实现高产的前提条件，越早的妊娠诊断越有利于缩短产子间隔。而在有些情况下，管理者也可能希望尽早地终止计划之外的妊娠。因此了解动物正常繁殖生理状态，在农场建立一个怀孕诊断程序，检测个体是否妊娠，允许生产者做出管理决定，可以避免不符合生产需求的个体在农场中占用过多的资源。

褐家鼠(Rattus norvegicus)，是经人工选育得到多种品系白化型大鼠，是仅次于小鼠的常用试验动物，通常被用作测试新的程序和药物的安全性。他们在确定遗传关系、低成本和相对较短的寿命、很小的生活空间等方面具有很大的优势。常用作研究的品系包括SD、Wistar、Fisher、SHR、ACI大鼠等。人们会根据自己实验的需求和每种品系的特性进行选择。其中SD大鼠多用作内分泌系统的实验，抗病性强，广泛应用于良好实验室操作规范(Good Laboratory Practice，GLP)实验。妊娠大鼠作为很多试验的理想模型，不同妊娠期的生理生化变化，对实验设计可能都有不同的影响。目前检测妊娠的主要方法包括阴栓观察法和显微镜涂片观察的方法。对条件要求不高的实验，普遍应用阴栓法，较为便捷，对大鼠无伤害。样本量小，对动物或样本要求严格的采用显微镜涂片的方法，操作较为复杂，诊断较为准确。

多年来的研究进展表明，由于基因的数量有限，蛋白质的修饰是调节其功能的重要因素。糖基化是翻译后修饰最丰富和复杂的形式，对蛋白质的折叠、分配、稳定性和活性有显著的影响，是在细胞表面存在的蛋白质和脂质性质的一个重要调节剂。随着糖组学的迅速发展，寻找个体妊娠与否甚至是异常妊娠与否的生物标志物，以及分析两性之间糖链的差异，是随着新技术诞生，应运而生的新的探索方向。

糖组学可以被定义为对所有糖类(单糖、低聚糖、多聚糖及其修饰)的全面阐释。单糖是糖链的基本构件，哺乳动物糖链仅由十种核心单糖构成。在糖苷酶和糖基转移酶参与的几种酶促反应条件下，基本构件组成多样的糖链结构。真核蛋白质糖基化通常是以糖苷键与丝氨酸/苏氨酸残基连接形成的O-糖链，与天冬胺酸残基相连形成的N-糖链。哺乳动物大于50％的蛋白质有糖链修饰，糖蛋白出现在所有哺乳动物的体液当中在不同的物种和系统发育之间进化的糖链存在差异，这是免疫系统在区分自我和非自我之间的重要标志。

凝集素芯片技术具有覆盖率高、操作简便、实验性能快速的特点，可根据凝集素鉴定具体多糖结构的特点进行设计，在不释放蛋白质的情况下，对生物样本中的N-糖链和O-糖链同时定量分析。如利用凝集素芯片对患有绒毛膜癌的妊娠个体进行糖链分析寻找新的癌症指标，检测包括人、公猪、公牛、山羊和兔子物种哺乳动物精子表面糖链的差异，这些努力都为基础和临床的诊断提供了更多支持。

发明内容

本发明的目的在于于获得一种简便、准确鉴别SD大鼠妊娠的方法。申请人通过对SD大鼠的尿液糖蛋白糖链进行大量的分析、实验，提出了一种特定凝集素探针组合，可用于快速鉴别尿液中糖蛋白糖链的变化，以此有效鉴别SD大鼠的妊娠状况。

该特定凝集素探针组合是Jacalin、PWM和HHL，鉴别依据为：当样本检测结果为Jacalin表达上调，且PWM和HHL表达下调，则表明相应雌性大鼠在取样时处于妊娠期(这里的“妊娠期”不包括妊娠早期，即符合上述情况时，表明样本主体在取样时处于妊娠中期或妊娠后期，反之表明样本主体在取样时处于妊娠早期或未妊娠)。

这里，相关测试产品给出“鉴别依据”的具体形式不限，例如：随附的产品说明书中记载上述条件；涉及到软件的，则还可由相应的算法体现该依据。