[发明专利]一种测定烟草中总黄酮含量的方法

权利要求书

1.一种测定烟草中总黄酮含量的方法，具体采用以下步骤：

(1)准确称取1.0g烟末置于150mL具塞三角瓶中，加入80％乙醇溶液100mL，摇匀后盖紧塞子放在振摇器上，以150r/min振荡萃取30min，用定性滤纸过滤萃取液，收集滤液作为样品溶液备用；

(2)全自动间断化学分析仪分析：

①配制显色剂：称取亚硝酸钠10.00g，硝酸铝25.00g，用800mL去离子水溶解，然后定容至1000mL；

②配制氢氧化钠溶液：称取40.00g氢氧化钠溶于800mL去离子水中，然后定容至1000mL；

③仪器参数设置：检测波长：510nm；样品溶液及反应试剂加入量：样品溶液为120μL，显色剂为180μL，氢氧化钠溶液为160μL；反应时间：取样针依次吸入样品溶液和显色剂至比色池内，36s后再移取氢氧化钠溶液至比色池内，再反应256s后测定吸光度；样品溶液稀释：自动稀释模式；

④上机分析：将样品溶液移入间断化学分析仪样品盘，分别将显色剂和氢氧化钠溶液放入间断化学分析仪的试剂槽中，编制样品运行表，按设定的仪器参数自动添加各试液，顺序运行并测定；

(3)绘制标准工作曲线：准确称取0.200g芦丁于200mL乙醇中混合均匀，再用去离子水定容至1000mL，得到含量为200mg/L的总黄酮标准工作液；设置间断化学分析仪的自动稀释倍数至标准工作液浓度点分别为20、60、100、140、180和200mg/L，将总黄酮标准工作液加入间断化学分析仪母液盘后，仪器按设置的自动稀释倍数稀释标准曲线各浓度点并测试，得到标准工作曲线方程为：y＝0.0023x+0.0051，相关系数r²＝0.9991；

(4)结果计算：

将待测烟末样品溶液所对应的总黄酮仪器测定值代入公式(1)计算，得到待测烟末中的总黄酮含量，并以两次平行测定的平均值作为最终的测定结果；

式中：P—待测烟末中的总黄酮含量(mg/g)，C—样品溶液所对应的总黄酮仪器测定值(mg/L)，V—萃取液体积(mL)，m—烟末样品质量(g)。