[发明专利]由自养、异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒及制备方法

权利要求书

1.一种由自养、异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒，其特征在于，所述复合固体颗粒由自养反硝化细菌和异养反硝化细菌组成；所述的自养反硝化细菌为脱氮硫杆菌，异养反硝化细菌包括枯草芽孢杆菌、蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌；所述复合固体颗粒按重量百分比包括脱氮硫杆菌15％-20％，枯草芽孢杆菌30％-40％，蒙式假单胞菌15％-25％和粪产碱杆菌25％-30％。

2.一种由自养、异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：用接种环取斜面保种的脱氮硫杆菌、枯草芽孢杆菌、蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌各两环，分别接种于各自的固体培养基中进行培养，培养温度均为30-35℃，培养时间均为1-5d，分别得到脱氮硫杆菌、枯草芽孢杆菌、蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的活化菌种；

步骤2：根据各菌种对氧气需求的不同，分别将各菌种的种子培养基分装至250mL或500mL三角瓶中；用接种环取脱氮硫杆菌活化菌、枯草芽孢杆菌活化菌、蒙氏假单胞菌活化菌和粪产碱杆菌活化菌各两环，接种于各自的种子培养基中进行摇床振荡培养，分别得到脱氮硫杆菌、枯草芽孢杆菌、蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液；

步骤3：将脱氮硫杆菌、枯草芽孢杆菌、蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的种子液分别接种于各自的发酵培养基进行摇床振荡培养，然后分别得到脱氮硫杆菌、枯草芽孢杆菌、蒙氏假单胞菌和粪产碱杆菌的高活性菌液；

步骤4：将步骤3得到的高活性菌液按照重量百分比：脱氮硫杆菌15％-20％，枯草芽孢杆菌30％-40％，蒙式假单胞菌15％-25％，粪产碱杆菌25％-30％，进行混合，得复合菌液；

步骤5：取步骤4得到的复合菌液，进行5000r/min离心处理，去除上清液，得湿菌体；

步骤6：将步骤5得到的湿菌体在摇摆机上制粒，再进行干燥处理；

步骤7：将步骤6得到的物料在30℃条件下进行粉碎，再过50目筛网，筛后粗料重新粉碎，得到由自养—异养反硝化菌群制备的高活性复合固体颗粒。

3.根据权利要求2所述的由自养、异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法，其特征在于，所述步骤1中固体培养基均为牛肉膏蛋白胨培养基，按重量百分比由100重量份的水，5重量份的牛肉膏，10重量份的蛋白胨，5重量份的氯化钙和20重量份的琼脂配置而成。

4.根据权利要求3所述的由自养、异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法，其特征在于，所述步骤2中脱氮硫杆菌种子培养基按重量百分比由100重量份的水中添加1重量份的葡萄糖，1重量份的玉米浆，0.6重量份的蛋白胨，1重量份的酵母膏，0.15重量份的氯化钙，0.5重量份的磷酸二氢钾和0.05重量份的硫酸镁配置而成；取200mL所述脱氮硫杆菌种子培养基至250mL三角瓶中，将脱氮硫杆菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养，在光照强度5000x条件下，摇床振荡培养转速240r/min，摇床振荡培养温度33℃，摇床振荡培养时间6d。

5.根据权利要求4所述的由自养、异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌的种子培养基按重量百分比由100重量份的水，10重量份的胰蛋白胨，5重量份的氯化钠和5重量份的酵母提取物配置而成；取100mL所述枯草芽孢杆菌种子培养基至500mL三角瓶中，将枯草芽孢杆菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速120r/min，摇床振荡培养温度37℃，摇床振荡培养时间24h。

6.根据权利要求5所述的由自养、异养反硝化菌群制备复合固体颗粒的方法，其特征在于，蒙氏假单胞菌的种子培养基按重量百分比由100重量份的水，3重量份的葡萄糖，1重量份的蛋白胨，0.5重量份的牛肉膏，0.5重量份的硝酸铵，0.2重量份的磷酸二氢钾和0.1重量份的硫酸镁配置而成；取100mL所述蒙氏假单胞菌种子培养基至250mL三角瓶中，将蒙氏假单胞菌的活化菌种接种于种子培养基中进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速180r/min，摇床振荡培养温度30℃，摇床振荡培养时间24h。