[发明专利]一种CheY2突变型蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种CheY2突变型蛋白及其应用。具体地，所述CheY2突变型蛋白在野生型的趋化响应调节蛋白CheY2的第93位、96位、107位、109位、123位氨基酸中的至少1个氨基酸发生突变。相比野生型CheY2蛋白，本发明的CheY2蛋白突变体可显著提高农杆菌在游动平板上的游动能力，以及对毛细管中对单一物质乙酰丁香酮AS（但不限于AS）趋化能力，同时显著提高CheY2蛋白与鞭毛马达调节区FliM蛋白的结合能力。

技术领域

本发明属于微生物应用领域，涉及一种农杆菌CheY2突变型蛋白及其应用。

背景技术

根癌农杆菌是一种革兰氏阴性菌，它能将自身Ti质粒上的一段DNA序列(也称为T-DNA)转移并整合到宿主植物基因组中，导致冠瘿瘤的产生，并遗传转化宿主。因此，人们将所需要的目的基因插入到经过改造后的T-DNA区域，借助根癌农杆菌的侵染来实现外源基因向植物细胞的转移与整合，以此获得转基因植株。目前，根癌农杆菌已经成为植物转基因的重要工具菌。通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术，使许多重要的农业和园艺作物转化成功，为在遗传性状、作物产量和抗逆性等方面进行遗传改良提供了很好的基础。

根癌农杆菌对植物受伤组织释放化学物质的趋化响应是其侵染宿主细胞的第一个步骤。大量的文献表明趋化性在各种动物病原菌和植物病原菌的侵染宿主的毒力过程中具有重要的作用。并且根癌农杆菌的趋化能力应用前景十分广阔，其拥有20个趋化响应受体蛋白(MCPs)，文献报道农杆菌对重金属离子具有出色的趋化和利用能力，便于其在未来的环境污染治理方面得到应用。与此前报道的细菌或古细菌的趋化系统不同，根癌农杆菌只有一个趋化操纵子，其中有两个同源的趋化响应调节蛋白CheY，CheY1和CheY2。其中CheY2对农杆菌趋化性的调节起着决定性的作用。

但是天然的农杆菌对趋化吸引物(如AS，但不限于AS)的趋化响应调节能力不够显著，相关趋化性实验重复性较差，这对于实验室进行细菌趋化性验证等相关科研活动中产生较大影响。因此，本领域迫切需要发明一种具有强响应调节作用的CheY蛋白，产成一种改造菌，能够具有较强的趋化能力，满足目前的科研及未来生产应用的需要。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种CheY2突变型蛋白，该含有改造后的趋化响应调节蛋白的宿主菌对趋化吸引物的趋化能力更强，从而使工程菌的趋化强度满足人们在科研和生产过程中的需要。

本发明还要解决的技术问题是提供了核酸或基因，所述的核酸或基因编码所述的突变型蛋白。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种载体，所述载体包含所述的核酸或基因。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种宿主细胞或重组菌。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种产生所述的CheY2突变型蛋白的方法。

本发明最后要解决的技术问题是提供了CheY2突变型蛋白的用途。

技术方案：本发明提供了一种CheY2突变型蛋白，所述的突变蛋白为非天然蛋白，所述CheY2突变型蛋白在野生型的趋化响应调节蛋白CheY2的第96位、第107位、第109位或第123位氨基酸中的至少1个氨基酸发生突变。

在另一优选例中，与野生型的趋化响应调节蛋白(CheY2)相比，所述趋化响应调节蛋白(CheY2)突变蛋白的调节能力提高了10％，较佳地，提高了25％，更佳地，提高了50％，最佳地，提高了100％。

在另一优选例中，所述氨基酸可各自独立地突变为极性氨基酸。

在另一优选例中，所述氨基酸各自独立突变的类型可以相同，可以不同。

在另一优选例中，所述组氨酸可各自独立地突变为选自下组的一种或多种氨基酸：丙氨酸(A)、赖氨酸(K)、色氨酸(W)、缬氨酸(V)、精氨酸(R)或其组合。