[发明专利]用于诊断线虫感染的新测定法

说明书

本发明涉及诊断上有用的载体，其包含(a)包含SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列或其变体的肽，以及(b)犬弓蛔虫幼虫的体细胞裂解物。本发明进一步涉及包含本发明的诊断上有用的载体的试剂盒、用途、方法、组合物。

技术领域

本发明涉及诊断上有用的载体，其包含(a)包含SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列或其变体的肽，以及(b)犬弓蛔虫(Toxocara canis)幼虫的体细胞裂解物。此外，本发明涉及包含本发明的诊断上有用的载体的试剂盒、用途、方法、组合物。

背景技术

弓蛔虫病是由蛔虫、犬弓蛔虫或猫弓蛔虫(Toxocara cati)所引起的人体蠕虫感染。这种感染发生在摄入含有完全发育的弓蛔虫属物种感染性幼虫的含胚卵时。人体肠道中的幼虫会穿透肠壁并通过血管迁移到达肝脏、肌肉和肺部，甚至迁移到眼睛和大脑中。

弓蛔虫病通常被称为内脏幼虫移行症(VLM)。其他名称或相关症状可能是眼幼虫移行症(OLM)、Weingarten病、Frimodt-综合征或嗜酸性假白血病、线虫眼炎、弓蛔虫疾病、toxocarose或隐性弓蛔虫病。这种动物传染的蠕虫感染是罕见的致盲原因并可能引发风湿、神经或哮喘症状[Schantz,PM(1994),Journal of the American VeterinaryMedical Association；204(7):1023–8]。人通常通过从污染源(土壤、未煮熟的肉、新鲜或未洗涤的蔬菜)摄入含胚卵(每个都含有发育完全的幼虫，L2)而受到感染。

犬弓蛔虫是一种线虫，其基本生命周期由七个时期组成，一个虫卵期、四个幼虫期(L1、L2、L3、L4)和包括雌雄分开的两个成虫期。线虫在幼虫期蜕皮四次，在每个幼虫期结束时发生蜕皮。

因为用于弓蛔虫病的诊断和检测的方法对于其预防和治疗是至关重要的，本领域公开了几种基于PCR、蛋白质印迹(western-blot)和ELISA的检测测定法。然而，PCR测定法需要更熟练的技术人员和更昂贵的设备。这可能是限制性因素，特别是在弓蛔虫血清阳性率较高的国家中。

因此，诊断依赖于使用弓蛔虫排泄分泌抗原的灵敏的免疫学方法(例如，ELISA和蛋白质印迹)。但是，目前的免疫学弓蛔虫测定法无法同时提供高特异性和高灵敏性。dosSantos等人[dos Santos等人(2019),PLoS One；14(3)]、Jin等人[Jin等人(2013),KoreanJ Parasitol；51(4):433-9]、Mohamad等人[Mohamad等人(2009),J Clin Microbiol；47(6):1712-7]和Norhaida等人[Norhaida等人(2008),Ann Trop Med Parasitol；102(2):151-60]公开了这样的测定法的实例。

因此，长期以来都存在提供用于对弓蛔虫感染进行灵敏性和特异性相结合的诊断的血清学测定法的需求。

发明内容

本发明人令人惊讶地发现，结合使用包含SEQ ID NO:1中所示氨基酸的肽和犬弓蛔虫幼虫的体细胞裂解物产生了提供高灵敏性和高特异性比例均衡的免疫学测定法(例如，ELISA)。优选地当将肽和裂解物混合并共定位到诊断载体上时，能够观察到这种高灵敏性和高特异性比例均衡。

因此，在第一方面，本发明涉及诊断上有用的载体，其包含(a)包含SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列或其变体的肽，以及(b)犬弓蛔虫幼虫的体细胞裂解物。

在其他优选实施方案中，所述载体选自玻璃载玻片、生物芯片、微量滴定板、侧流装置、测试条、膜、线性印迹(line blot)、层析柱和珠粒。

在第二方面，本发明涉及试剂盒，其包含本发明的诊断上有用的载体和用于检测人、犬科或啮齿目抗体的标记抗体。