[发明专利]一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法

权利要求书

1.一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、应用损伤模型和促排卵模型找出目标研究因子Btc；

步骤二、Btc生长因子及其受体在卵巢中的表达及定位；

步骤三、探究Btc生长因子对于原始卵泡的激活作用，应用Btc在体外对新生小鼠卵巢进行短期培养后，通过卵巢发育情况评价Btc对原始卵泡激活的影响；

步骤四、验证Btc因子是否通过PI3K和/或mTOR信号通路调节原始卵泡的激活；

步骤五、分析Btc生长因子处理诱导转录组水平的改变，找出Btc通过调控哪些关键分子激活原始卵泡。

2.根据权利要求1所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：所述步骤一中通过RNA-seq筛选出卵巢手术模型中的差异表达基因，以及OvarianKaleidoscope Database数据库中的排卵过程中的动态表达图谱。

3.根据权利要求1所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：所述步骤二中通过RT-qPCR、Westernblot和免疫组化实验分别从mRNA及蛋白水平检测Btc在新生小鼠卵巢中的表达和定位情况。

4.根据权利要求1所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：所述步骤三中对于卵巢发育情况评价检测的指标包括：卵泡计数、细胞凋亡和增殖情况、卵泡激活和发育标记分子表达的变化等。

5.根据权利要求1所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：在步骤三的基础上，选用衰老小鼠模型，模拟卵巢功能衰竭情况，在向卵巢包囊内注射Btc后，观察老年小鼠各级卵泡的生长发育情况，并进行生育力鉴定。

6.根据权利要求1所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：步骤四中采用PI3K和/或mTOR信号通路特异性阻断剂Wortmannin和Rapamycin以及Btc受体EGFR拮抗剂与Btc共同处理新生小鼠卵巢。

7.根据权利要求6所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：步骤四中应用Western-blot方法验证信号通路抑制剂的特异性，以及应用免疫组化方法检测添加抑制剂后，卵巢中原始卵泡激活标志分子的表达是否发生变化。

8.根据权利要求7所述的一种BTC生长因子对于原始卵泡激活的方法，其特征在于：步骤四中通过收集卵巢组织进行连续切片以及卵泡计数，通过卵泡发育情况进一步确定抑制剂的作用，并找到Btc生长因子依赖哪一条信号通路调节原始卵泡激活的过程。