[发明专利]一种检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E‑Cadherin表达的免疫荧光试剂盒，属于分子生物学技术领域。本发明提供了一种检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E‑Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发乳腺癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫荧光技术检测CTC的E‑Cadherin表达情况。本发明提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发乳腺癌患者E‑Cadherin表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。同时能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。

技术领域

本发明涉及一种检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒，属于分子生物学技术领域。

背景技术

乳腺癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一，并且发病率呈逐年上升的趋势。乳腺癌术后复发转移导致的死亡位居中国和美国女性癌症死因的第6位和第2位，是乳腺癌治疗失败的主要原因。因此，对乳腺癌术后转移的治疗关键在于利用有效的检查技术及时准确的做出诊断。抗原肿瘤标志物检测具有简便快捷、对患者造成的创伤和损害小等优势，对乳腺癌的发生、发展、治疗及预后具有重要的临床意义。

E-钙粘蛋白(E—Cadherin)是上皮细胞表型最经典的标志物，表达于绝大多数上皮细胞表面，尤以细胞连接处最为集中，是上皮细胞表面最重要的细胞间粘附分子之一。它通过介导细胞间的粘附反应，维持上皮组织结构的完整性和细胞的极性，具有细胞接触性生长抑制功能，防止细胞的相互分离。E-Cadherin是典型的某些类型肿瘤形成/浸润抑制因子，E-Cadherin的检测对于检测乳腺癌转移及复发具有重要意义。而目前临床实践中，乳腺癌患者E-Cadherin检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。

目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东凯歌智能机器有限公司就循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术、检测设备、试剂盒开发与生产进行合作，山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司等单位进行推广应用，本项目为山东省重大科技创新工程项目，以山东第一医科大学济南校区的山东省药物研究院为核心，落实注册人制度，依托循环肿瘤细胞检测鉴定核心诊断技术，进一步注册鉴定诊断试剂盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、细胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受体、孕激素受体、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作为CTCs表达的示踪剂，注册超灵敏、超快速、高覆盖、低成本、准确特异的鉴定诊断试剂盒，通过与在济南注册的山东凯歌智能机器有限公司、山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司合作进行研发与推广。

发明内容

为了克服多次或实时检测的问题，同时避免穿刺活检面临出血、胰瘘、感染等风险，本发明提供了一种检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，利用膜过滤装置分离获得无法获取组织标本的晚期或复发乳腺癌患者外周血中的CTC，进一步运用免疫荧光技术检测CTC的E-Cadherin表达情况。

本发明采用的技术方案如下：