[发明专利]血清外泌体微小RNAs的应用和肝癌检测试剂盒

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及血清外泌体微小RNAs的应用和肝癌检测试剂盒。所述试剂盒包括检测物，所述检测物包括：与血清外泌体微小RNA hsa‑miR‑203b‑5p特异性结合的检测物；与血清外泌体微小RNA hsa‑miR‑219a‑2‑3p特异性结合的检测物；与血清外泌体微小RNA hsa‑miR‑4661‑5p特异性结合的检测物。本发明通过抽取人的血液并对其中的血清外泌体hsa‑miR‑203b‑5p、hsa‑miR‑219a‑2‑3p和hsa‑miR‑4661‑5p进行测量就可以实现肝癌的无创、非侵袭性筛查或者诊断，操作简单方便，具有较高特异性和敏感性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，更具体地，涉及血清外泌体微小RNAs作为肝癌生物标志物在制备肝癌检测试剂、肝癌检测试剂盒或者肝癌检测装置中的应用，以及一种基于血清外泌体微小RNAs的肝癌检测试剂盒。

背景技术

原发性肝癌是世界范围内常见的高发病率、高致死率的恶性肿瘤之一，其中肝细胞性肝癌（简称肝癌，Hepatocellular Carcinoma，HCC）占原发性肝癌的85% ~ 90%以上。根据美国癌症协会（ACS）2018年针对185个国家的36种癌症统计，肝癌的新增病例数为84.1万，位居全球第7位，死亡人数为78.2万，位居全球第3位，其中，中国肝癌的新发病例及死亡病例均约占全球病例的一半，并且在全国新增癌症病例中排名第4位，死亡病例中排名第2位。由于缺乏高效、灵敏和特异性强的肝癌早期检测方法或技术，导致60% ~ 70%的肝癌患者诊断时已处于中晚期，从而错失根治性切除机会。因此，肝癌的早期检测、早期诊断和早期治疗是提高肝癌患者生存率、降低肝癌死亡率最有效的途径之一。

目前，临床上应用比较成熟的肝癌早期检测手段主要有依赖于影像学的检测手段和肿瘤生物标志物的检测手段等。在影像学检测方面，虽然许多医院和体检机构等已经拥有较为精密的仪器设备，例如电脑断层扫描，磁共振成像或者血管摄影等，但是影像学检测一般价格比较昂贵并且具有放射性或者侵袭性等，从而难以实现全覆盖式普及。在肿瘤生物标志物方面，主要有甲胎蛋白（AFP）、C反应性蛋白（CRP）和去羧凝血酶原（DCP）等，该类检测手段虽然比较有效，具有无创、非侵袭性，但是，它们的检测灵敏度和特异性比较差，其中，约有35% ~ 50%肝癌患者的AFP水平低于警戒值（20 ng/mL），而且，AFP在早期肝癌筛查中的检出率仅为22%。因此，探究新型、高灵敏度、高特异性，并且价格低廉又易于检测的肝癌早期诊断标志物具有重要的临床意义。

微小RNAs（microRNAs，miRNAs）是一类内源性、非编码、具有调控功能的单链小RNAs，长度约为18 ~ 25个核苷酸，miRNAs在肿瘤的发生与调控方面发挥着重要的作用。近年来，大量的研究发现，在人体血液、唾液和尿液等多种体液中能够检测到大量外泌体包裹的miRNAs，该类miRNAs具有组织、细胞特异性，并且与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移等密切相关。因此，外泌体miRNAs可以作为潜在的肿瘤生物标志物用于肿瘤的早期检测或诊断。

发明内容

本发明的目的是提供新的可以作为潜在肿瘤生物标志物的外泌体miRNAs。本发明通过实验研究发现，与健康人相比，肝癌患者血清外泌体hsa-miR-203b-5p、hsa-miR-219a-2-3p和hsa-miR-4661-5p均存在显著性高表达（P0.05）。因此，基于这三种肿瘤生物标记物的肝癌诊断或筛查具有重要的临床意义。

具体地，本发明的第一方面提供血清外泌体微小RNAs作为肝癌生物标志物在制备肝癌检测试剂、肝癌检测试剂盒或者肝癌检测装置中的应用，其中，所述血清外泌体微小RNAs为以下三种微小RNA的组合：hsa-miR-203b-5p、hsa-miR-219a-2-3p和hsa-miR-4661-5p。