[发明专利]一种动物组织透明化方法

权利要求书

1.一种动物组织透明化方法，包括以下步骤：

1)麻醉动物、向动物心脏依次灌注心脏灌注液和组织固定液；然后解剖并分离动物组织；

2)将骨骼组织置于脱钙溶液中脱钙5～12d获得脱钙后的骨骼组织；在所述脱钙过程中每1～3天进行一次换液；

3)将脱钙后的骨骼组织和软组织分别置于脱色液中进行脱色获得脱色后的组织；

4)将所述脱色后的组织置于脱脂液中进行梯度脱脂后，置于脱水液中脱水获得脱水组织；

5)将所述脱水组织置于透明液中进行透明获得透明组织。

2.根据权利要求1所述的动物组织透明化方法，其特征在于，所述动物包括小鼠。

3.根据权利要求1或2所述的动物组织透明化方法，其特征在于，所述软组织包括脏器组织和视网膜。

4.根据权利要求1所述的动物组织透明化方法，其特征在于，所述组织还包括胚胎，当所述组织为胚胎时，所述胚胎进行1～3d脱钙处理。

5.根据权利要求1所述的动物组织透明化方法，其特征在于，步骤1)中所述的心脏灌注液为0.9％的无菌生理盐水注射液或0.04～0.06M的EDTA溶液；所述组织固定液为3.5％～4.5％的多聚甲醛PBS溶液；所述心脏灌注液和组织固定液的灌注体积比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。

6.根据权利要求1或4所述的动物组织透明化方法，其特征在于，步骤2)中所述脱钙液为0.45～0.55M的EDTA溶液，所述脱钙液的pH值为6.4～6.6。

7.根据权利要求1所述的动物组织透明化方法，其特征在于，步骤3)中所述脱色液体积分数为28％～32％的四羟丙基乙二胺溶液；所述脱色的温度为36～38℃，所述脱色的时间为8～96h。

8.根据权利要求1所述的动物组织透明化方法，其特征在于，步骤4)中所述梯度脱脂包括依次进行的第一脱脂、第二脱脂和第三脱脂；所述脱脂液包括第一脱脂液、第二脱脂液和第三脱脂液；所述第一脱脂液为体积分数28％～32％的叔丁醇溶液；所述第二脱脂液为体积分数58％～62％的叔丁醇溶液；所述第三脱脂液为体积分数73％～77％的叔丁醇溶液；所述第一脱脂的时间为4～7h，所述第二脱脂的时间为7～9h，所述第三脱脂的时间为30～35h。

9.根据权利要求1或8所述的动物组织透明化方法，其特征在于，步骤4)中所述脱水液包括以下体积百分含量的组分：73％～77％的叔丁醇溶液、18％～22％的聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯和4％～6％的四羟丙基乙二胺溶液；所述脱水的时间为50～100h。

10.根据权利要求1所述的动物组织透明化方法，其特征在于，所述透明液包括以下体积百分含量的组分：76％～80％苯甲酸苄酯、18％～22％聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯和1％～3％的四羟丙基乙二胺溶液；所述透明的时间为5～7h。