[发明专利]一种间充质干细胞的制备方法与应用

权利要求书

1.权利要求1所述的一种间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)从骨髓中收集样本，将血液样本和细胞分离液加入分离罐中进行细胞分离，得到细胞胚胎，使胚胎体附着到培养皿以诱导胚胎体自发分化为间充质干细胞，以增殖性方式培养间充质干细胞，对细胞进行分选以获得间充质干细胞，同时维持间充质干细胞的一致性；

2)将获得的间充质干细胞转移至培养罐，向培养罐中加入微载体以使间充质干细胞贴附微载体生长，向培养罐中加入培养基，排出培养罐中的废液，并向培养罐中加入微载体，以使间充质干细胞扩增；

3)当细胞密度接近90％时，加入含有抗坏血酸的完全培养液培养8-9天，用称为细胞因子的蛋白质对间充质干细胞进行预处理，以增强间充质干细胞的抗炎能力并促进其细胞外囊泡释放；

4)加入脱细胞液分离细胞外囊泡以及间充质干细胞；

5)收集获得的间充质干细胞和细胞外囊泡终产品，进行细胞洗涤后包装。

2.根据权利要求1所述的细胞外囊泡，其特征在于，细胞外囊泡作为细胞间通信的一种形式在细胞间运输货物，细胞外囊泡包括DNA、RNA和蛋白质，可以清除细胞中的有害物质，本方法采用的细胞外囊泡不含动物源成分。

3.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述培养基内包括有α-MEM和胎牛血清，它们的体积比为(4-9):1，并且培养基含有抗生素，抗生素的含量为10～200U/mL，培养基中还含有抗坏血酸100-200uM。

4.权利要求1所述细胞外囊泡在治疗阿兹海默症领域的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，通过鼻内注入间充质干细胞及细胞外囊泡，抑制大脑小胶质细胞的激活，增加树突棘的密度。

6.权利要求1所述间充质干细胞在细胞培养中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，将待培养细胞接种在间充质干细胞培养板中，在37℃、5％CO2环境下培养。