[发明专利]一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法

权利要求书

1.一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、黑皮鸡枞菌预处理：从黑皮鸡枞头茬菇中选取基部直径1.5厘米以上头茬成熟子实体，然后切去柄部，并用酒精棉球擦拭表面，对其表面进行消毒，选用浓度为75％酒精进行擦拭，能够有效的对子实体表面进行消毒，擦拭时间为10-20s，保证将子实体表面杂质擦拭干净即可；

S2、孢子培养：用无菌镊子和手术刀切取S1中处理好的成熟子实体菌盖边缘，再用无菌的镊子撕去表皮，之后将剩余的菌褶部分，放入灭菌的空试管中，然后将试管固定在试管夹具上，并置于散射光下培养使其弹射孢子，最终形成孢子印，进行散光培养时，需在室温条件下25℃进行，并保证散光均匀照射在试管内部的菌褶部分；

S3、孢子菌丝培养：将S2中完成弹射孢子的菌褶组织取出，然后用接种针蘸取孢子粉并转接到加入30微克每毫升链霉素的PDA试管培养基的底部，进行孢子菌丝培养，最终得到单核菌丝双核菌丝共存的混合菌丝，孢子在萌发后会形成单核菌丝互相杂交，而形成的单核菌丝又会产生双核菌丝，从而得到单核菌丝和双核菌丝共存的混合菌丝；

S4、母种菌丝培养：当S3中的混合菌丝生长至3厘米左右时，选择菌丝尖端整齐旺盛的部分，并取1毫米的菌丝转接至新的PDA试管，然后重复同样的办法继续转接2次，待菌丝长满试管后，便可得到作为母种的混合菌丝，由于单核菌丝和带病毒菌丝通常长势较弱，因此尖端菌丝通常为生长旺盛的双核无毒混合菌丝，因此选取尖端部分作为母种菌丝最佳；

S5、母种出菇培养：取一支S4中得到的混合菌丝母种，并将其分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中，待母种在容器中长满，便可以得到茬菇，将混合菌丝分别转接至摇瓶、发酵罐和栽培袋中培养，是为了培养出适应不同生长环境的茬菇，以便找到最合适的母种；

S6、复壮母种选取：在S5茬菇中取3-5个优质的子实体并进行组织分离，然后将分离后的子实体分别放入试管中，再对试管分别进行编号，经过纯化后获得多个编号的母种，之后从中挑选1-2个优质的母种，作为黑皮鸡枞的复壮母种，选取母种的菌丝需满足生长旺盛、洁白、浓密以及尖端整齐，保证后期生长出来的母种能够达到复壮效果。

2.根据权利要求1所述的一种黑皮鸡枞菌种的复壮方法，其特征在于：用于S2中孢子培养时，将试管固定在试管夹具上，所述试管夹具包括底座(1)和放置板(2)，所述底座(1)顶部的两侧均固定连接有支撑杆(3)，所述放置板(2)底部的左右两侧分别与两个支撑杆(3)的顶端固定连接，所述放置板(2)的顶部开设有凹槽(4)，所述凹槽(4)的内部设置有两个固定夹板(5)，所述固定夹板(5)外部的一侧固定连接有固定杆(6)，所述固定杆(6)的外表面套接有弹性件(7)，所述固定夹板(5)的内侧设置有防护层(8)。