[发明专利]甲状腺乳头状癌血清标志物及应用

说明书

本发明涉及一种用于PTC诊断的血清tRF标志物。其次提供检测tRF在血清中表达量的试剂在制备PTC诊断制剂中的应用。最后，提供一种PTC的诊断试剂盒，其可测定血清中tRF的含量，所述血清标志物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用本发明提供的tRF分子以及其特异性引物作为诊断试剂，可进一步提高PTC的诊断准确性，为临床医生快速掌握患者病情、制定诊疗方案提供帮助，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子靶向药物奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物分析技术及医学检测领域，尤其是涉及一种甲状腺乳头状癌血清标志物及其应用。

背景技术

过去十年，甲状腺癌已成为发病率最高的恶性肿瘤之一，其中甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)约占甲状腺癌的95％以上。准确的术前诊断对于减少不必要的甲状腺手术至关重要。目前，细针穿刺活检(Fine Needle Aspiration,FNA)被认为是区分甲状腺良恶性结节的最佳诊断工具。尽管如此，FNA仍然存在一些局限性。例如，FNA对于15-30％的结节仍诊断不明确。同时，FNA为有创性检查且对操作者的技术经验有较强的依赖性。因此，找到一种新的诊断方法以区分PTC与甲状腺良性病变至关重要。

tRFs(tRNA-derived fragments,tRFs)是衍生自成熟tRNA和前体tRNA的新型非编码RNA片段。tRFs通过在转录后水平调控基因表达，在多种疾病中发挥重要作用。近年来，随着高通量测序技术的广泛应用和生物信息学技术的快速发展，人们发现tRFs在多种类型的恶性肿瘤中呈特异性表达，例如前列腺癌，胃癌，慢性淋巴细胞性白血病和葡萄膜黑色素瘤等。同时，有研究表明特异表达的tRF分子与恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关。因此，tRF分子作为新型肿瘤标志物的潜在价值引起了人们的关注。

有研究证实，细胞外环境中也含有大量的tRFs分子，如人体的血清和血浆。Dhahbi等研究表明，血清中5'-tRNA片段的表达可能与乳腺癌综合征相关；Huang等进一步证明tDR-7816分子可以作为诊断早期非三联阴性乳腺癌患者的血清标志物。综上所述，血清中特异性表达的tRF分子有望作为一种生物标志物，为恶性肿瘤的准确诊断提供新思路。

发明内容

为了克服上述技术缺陷，本发明最主要的技术目的是提供一种用于PTC诊断的血清tRF标志物。其次提供检测tRF在血清中表达量的试剂在制备PTC诊断制剂中的应用。最后，提供一种PTC的诊断试剂盒，其可测定血清中tRF的含量。

为了达到上述技术目的，本发明采用的技术方案是，首先提供一种甲状腺乳头状癌血清标志物，所述血清标志物是tRF分子，可命名为tRF-Pro-AGG-018，其核苷酸序列为5’-GGCTCGTTGGTCTAGG-3’，如SEQ ID NO.1所示。本发明经过长时期研究实验，首次发现PTC患者血清中tRF-Pro-AGG-018分子的表达水平相比于对照组(良性结节组(NG)、正常人群组(HS))明显升高(p值分别为0.0085,0.0090)。ROC分析结果显示tRF-Pro-AGG-018对PTC有较高的诊断价值(AUC＝0.7111,P0.001,敏感性为78.79％，特异性为62.79％)。因此，通过检测可疑患有PTC人群的血清tRF-Pro-AGG-018的表达水平，可对PTC患者作出早期、快速的无创性筛查并辅助诊断。

进一步地，本发明提供用于检测所述血清标志物含量的PCR特异性引物。

其优选的核苷酸序列分别为：引物F：5’-TACAGTCCGACGATCGGCTC-3’，如SEQ IDNO.2所示；引物R：5’-CTCTTCCGATCTCCTAGACCAAC-3’，如SEQ ID NO.3所示。所述引物在扩增特异性和扩增效率上有明显优势。

接着提供所述PCR特异性引物在甲状腺乳头状癌诊断试剂中的应用。

以及所述PCR特异性引物在甲状腺乳头状癌诊断试剂盒中的应用。