[发明专利]一种β-胡萝卜素含量的测定方法

权利要求书

1.一种β-胡萝卜素含量的测定方法，先将待测样品进行前处理得到待测液，再通过高效液相色谱法分离检测待测液中的β-胡萝卜素，其特征在于，所述的前处理中采用一步法对待测样品进行预处理、皂化和萃取；所述高效液相色谱法所采用的流动相为100%甲醇；

所述的待测样品的制备的步骤为：

（1）称取0.05～0.5 g待测样品，放入棕色容量瓶中，在待测样品中加入0.1～0.2 g抗坏血酸、25～30 mL无水乙醇和4～6 mL氢氧化钾溶液，在45～65℃温度下超声25～35 min对待测样品进行皂化，皂化后冷却至室温，再加入60 mL石油醚，并用无水硫酸钠溶液定容至100 mL，振摇、静置分层；（2）取20 mL上述分层后的上层有机相置于蒸发皿中，于40～80℃水浴或40～60℃旋转蒸发仪中蒸干，蒸干后用二氯甲烷溶解并定容至20 mL，得到待测液；

所述高效液相色谱法采用的色谱条件为：

色谱柱：C18柱

柱温：40℃

流速：2.0 mL/min

流动相：100%甲醇

紫外检测器检测波长：450 nm

进样量：10 µL。

2.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，所述的每0.2 g待测样品加入的抗坏血酸为0.2 g，无水乙醇为25 mL ，氢氧化钾溶液为5 mL，石油醚为60mL。

3.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，所述的无水硫酸钠溶液的浓度为10%。

4.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，所述超声的条件为：超声频率40 kHz，超声功率600 W，加热温度45～65℃，超声时间25～35 min。

5.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，在用高效液相色谱法检测前先配制标准曲线溶液，标准曲线溶液的配制方法为：

（1）配制标准贮备液：称取β-胡萝卜素标准品12.5 mg，加入0.125 g BHT，用二氯甲烷溶解，转移至25 mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度；于-20℃以下避光保存，临用前标定；

（2）配制标准曲线溶液：取上述β-胡萝卜素标准贮备液，用二氯甲烷分别配制成浓度为2.5 µg/mL、5.0 µg/mL、10.0 µg/mL、15.0 µg/mL、20.0 µg/mL、50.0 µg/mL的标准曲线溶液。